細菌の多機能デハロゲナーゼを用いるダイオキシン分解系の開発
利用细菌多功能脱卤酶开发二恶英分解系统
基本信息
- 批准号:10876019
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 1999
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
高い結合エネルギーを有する炭素-フッ素結合を切断する新規酵素の単離に成功した。フルオロ酢酸を唯一の炭素源とするバッチ集積培養により、京都府宇治市の土壌からデハロゲナーゼ生産菌を取得した。16SrDNAの塩基配列から、本菌はBurkholderia属細菌であることが明らかとなり、Burkholderia sp.FA1と命名した。本菌体抽出液から、硫安分画、Butyl-Toyopearlクロマトグラフィー、DEAE-Toyopearlクロマトグラフィーによって、比活性にして約130倍にデハロゲナーゼを精製し、電気泳動的にほぼ均一な標品を得た。サブユニット分子量は約34,000、ネイティブ酵素の分子量は約79,000であったことから、本酵素は二重体として存在するものと考えられた。精製酵素は、フルオロ酢酸、クロロ酢酸、ブロモ酢酸に作用し、ハライドイオンの脱離を触媒したが、フルオロ酢酸に対する活性が最も高かった。フルオロ酢酸に対する活性は、クロロ酢酸に対する活性の約26倍、ブロモ酢酸に対する活性の約29倍であった。ジフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸、2-クロロプロピオン酸は本酵素の基質にはならなかった。フルオロ酢酸を基質としたときの至適pHは約9.5、Vmax値は11μmol.min^<-1>.mg^<-1>、Km値は5.1mMであった。本酵素は、難分解性の有機フッ素化合物の分解に有用であると考えられる。
High い combining エ ネ ル ギ ー を have す る carbon - フ ッ element combination を cut す る new rules enzyme の 単 from に successful し た. フ ル オ ロ boggy acid を の only carbon source と す る バ ッ チ set product training に よ り, Kyoto yu hong の soil 壌 か ら デ ハ ロ ゲ ナ ー ゼ producing bacteria を obtain し た. 16SrDNA <s:1> base pairing ら, this bacterium である Burkholderia genus bacteria である とが とが name ら ら とな とな た, Burkholderia sp.FA1と name た た. This bacteria extract か ら, sulfur content, Butyl - Toyopearl ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー, DEAE Toyopearl ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ っ て, than active に し て about 130 times に デ ハ ロ ゲ ナ ー ゼ を refined し, electric 気 swimming に ほ ぼ な uniform standard product を た. サ ブ ユ ニ ッ ト は molecular weight of about 34000, ネ イ テ ィ の ブ enzyme molecular weight about 79000 で は あ っ た こ と か ら, this enzyme は double と し て exist す る も の と exam え ら れ た. Refined enzyme は, フ ル オ ロ boggy acid, ク ロ ロ boggy acid, ブ ロ モ boggy acid に し, ハ ラ イ ド イ オ ン の from を catalyst し た が, フ ル オ ロ boggy acid に す seaborne る high active が most も か っ た. フ ル オ ロ boggy acid に す seaborne る active は, ク ロ ロ boggy acid に す seaborne る active の about 26 times, ブ ロ モ boggy acid に す seaborne る active の about 29 times で あ っ た. Youdaoplaceholder0 ロロ ロ oxalic acid, トリフ ロロ oxalic acid, 2-<s:1> ロロプロピ <s:1> <s:1> <s:1> acid the <s:1> matrix of this enzyme に ならな ならな った った った った った った った った った った った った った. フ ル オ ロ boggy acid を matrix と し た と き の to optimum pH is about 9.5, Vmax は numerical は 11 mu mol. Min ^ < 1 > mg ^ < 1 >, Km numerical は 5.1 mM で あ っ た. This enzyme フッ, the <s:1> decomposition of refractory <s:1> organic フッ compound <e:1> に is useful for であると examination えられる.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Ji-Quan Liu et al.: "Reaction mechanism of fluoroacetate dehalogenase from Moraxella sp.B." Journal of Biological Chemistry. 273・47. 30897-30902 (1998)
Ji-Quan Liu 等:“Moraxella sp.B. 的氟乙酸脱卤酶的反应机制”,《生物化学杂志》273・47(1998)。
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Vincenzo Nardi-Dei et al.: "DL-2-Haloacid dehalogenase from Pseu domonas sp.113 is a new class of dehalogenase catalyzing hydrolytic dehalogenation not involving enzyme-substrate ester intermediate"The Journal of Biological Chemistry. 273(30). 20977-20981
Vincenzo Nardi-Dei 等人:“来自 Pseu domonas sp.113 的 DL-2-Haloacid 脱卤酶是一类新的脱卤酶,催化水解脱卤,不涉及酶-底物酯中间体”《生物化学杂志》。
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丸山潤一
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