课题基金 / 基金详情

Gene trap法を用いた新たな細胞内蛋白輸送変異細胞株樹立法の開発

Gene trap法を用いた新たな細胞内蛋白輸送変異細胞株樹立法の開発
利用基因捕获法开发新的细胞内蛋白转运突变细胞系建立方法
批准号：
10878124
负责人：
大野 博司
金额：
$0.0万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1998 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878124/
关键词：
細胞内蛋白輸送チロシン・シグナルトランスゴルジ網変異細胞株gene trap法antisense法

项目摘要

项目成果

大野 博司的其他基金

相关文献

中文摘要
翻译
細胞内での選択的蛋白輸送は、細胞内小器官の蛋白質組成を正常に保ち、細胞が正しく機能するために重要である。ゴルジ体以降の分泌経路およびエンドサイトーシス経路における選択的蛋白輸送には、輸送される蛋白質の細胞質領域に存在するシグナル配列が必要である。最もよく見られるシグナル配列の一つであるチロシン・シグナルには、エンドサイトーシスやリソソーム局在のほか、トランスゴルジ網(TGN)局在シグナルとして機能するものもあるが、その分子機構は明らかではない。そこで、チロシン・シグナルによりTGNに局在する蛋白質であるTGN38をマーカー分子として、そのTGN局在を失った変異細胞を、gene trap法とantisense法を組み合わせた方法で樹立することにより、培養細胞での新たな変異導入法の開発を目指した。まず、IL-2受容体(Tac)の細胞外および膜貫通領域と、TGN局在シグナルを持つTGN38の細胞質領域とのキメラ蛋白を遺伝子導入したMDCK細胞を作製した。この細胞を用いて、ネオマイシン耐性遺伝子ベクターを導入し、G418耐性株、すなわちランダム・インテグレーションの頻度を調べたところ、3-5X10^<-5>であった。gene trapベクターとしては、splice acceptorの下流に、ネオマイシン耐性遺伝子を繋ぎ、その下流にさらに、anti-sense RNAを合成するためのプロモーターを逆向きに配置したものを作製中である。
英文摘要
細胞内での選択的蛋白輸送は、細胞内小器官の蛋白質組成を正常に保ち、細胞が正しく機能するために重要である。ゴルジ体以降の分泌経路およびエンドサイトーシス経路における選択的蛋白輸送には、輸送される蛋白質の細胞質領域に存在するシグナル配列が必要である。最もよく見られるシグナル配列の一つであるチロシン・シグナルには、エンドサイトーシスやリソソーム局在のほか、トランスゴルジ網(TGN)局在シグナルとして機能するものもあるが、その分子機構は明らかではない。そこで、チロシン・シグナルによりTGNに局在する蛋白質であるTGN38をマーカー分子として、そのTGN局在を失った変異細胞を、gene trap法とantisense法を組み合わせた方法で樹立することにより、培養細胞での新たな変異導入法の開発を目指した。まず、IL-2受容体(Tac)の細胞外および膜貫通領域と、TGN局在シグナルを持つTGN38の細胞質領域とのキメラ蛋白を遺伝子導入したMDCK細胞を作製した。この細胞を用いて、ネオマイシン耐性遺伝子ベクターを導入し、G418耐性株、すなわちランダム・インテグレーションの頻度を調べたところ、3-5X10^<-5>であった。gene trapベクターとしては、splice acceptorの下流に、ネオマイシン耐性遺伝子を繋ぎ、その下流にさらに、anti-sense RNAを合成するためのプロモーターを逆向きに配置したものを作製中である。
期刊论文(2)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Ohno,H.: "The medium subunits of clathrin adaptor complexes recognize distinct but overlapping sets of tyrosine-based sorting signals." J.Biol.Chem.273. 25915-25921 (1988)
Ohno,H.：“网格蛋白接头复合物的中等亚基识别不同但重叠的基于酪氨酸的分选信号集。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Park,S.Y.: "Resistance of Fc receptor-deficient mice to fatal glomerulonephritis." J.Clin.Iuv.102. 1229-1238 (1988)
Park,S.Y.：“Fc 受体缺陷小鼠对致命性肾小球肾炎的抵抗力。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
宿主ー腸内細菌叢相互作用が宿主の病理に及ぼす影響の研究
腸炎における粘膜障害治癒に関与する腸内細菌の同定とそのメカニズムの解明
Differentiation and function of M cells, a specialized intestinal epithelial cell type, in the mucosal immune system
生細胞における細胞内蛋白質輸送の新たなリアルタイム可視化法の開発