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Gene trap法を用いた新たな細胞内蛋白輸送変異細胞株樹立法の開発

利用基因捕获法开发新的细胞内蛋白转运突变细胞系建立方法

基本信息

批准号：
10878124
负责人：
大野博司
金额：
--
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞内での選択的蛋白輸送は、細胞内小器官の蛋白質組成を正常に保ち、細胞が正しく機能するために重要である。ゴルジ体以降の分泌経路およびエンドサイトーシス経路における選択的蛋白輸送には、輸送される蛋白質の細胞質領域に存在するシグナル配列が必要である。最もよく見られるシグナル配列の一つであるチロシン・シグナルには、エンドサイトーシスやリソソーム局在のほか、トランスゴルジ網(TGN)局在シグナルとして機能するものもあるが、その分子機構は明らかではない。そこで、チロシン・シグナルによりTGNに局在する蛋白質であるTGN38をマーカー分子として、そのTGN局在を失った変異細胞を、gene trap法とantisense法を組み合わせた方法で樹立することにより、培養細胞での新たな変異導入法の開発を目指した。まず、IL-2受容体(Tac)の細胞外および膜貫通領域と、TGN局在シグナルを持つTGN38の細胞質領域とのキメラ蛋白を遺伝子導入したMDCK細胞を作製した。この細胞を用いて、ネオマイシン耐性遺伝子ベクターを導入し、G418耐性株、すなわちランダム・インテグレーションの頻度を調べたところ、3-5X10^<-5>であった。gene trapベクターとしては、splice acceptorの下流に、ネオマイシン耐性遺伝子を繋ぎ、その下流にさらに、anti-sense RNAを合成するためのプロモーターを逆向きに配置したものを作製中である。

The protein delivery and small organ protein selected in the cell are organized into a normal cell and a normal cell. In order to lower the secretory pathway, the protein delivery system and the protein delivery system selected by the secretory pathway exist in the field of protein delivery. The most important information is to be assigned as soon as possible. This is the most important thing in the world. In this case, you can use the information system to make sure that the information system is available in the market, and that the TGN office is responsible for the operation of the machine. We need to know that the TGN office is responsible for the application of the protein, the TGN38, the TGN, the gene trap method, the antisense method, and so on. IL-2 receptor (Tac), extracellular receptor (Tac), membrane communication domain, TGN bureau in the field of TGN38 cell, protein carrier, MDCK cell, MDCK cell, cell. The cells were divided into four groups: G418, G418 and G418. Gene trap indecent, splice acceptor obscene, patience obscene, obscene, anti-sense RNA synthesizable, reverse configuration.