糖鎖-オリゴDNA複合体を用いたアンチセンスオリゴDNAの細胞ターゲッティング

使用糖链-寡聚 DNA 复合物对反义寡聚 DNA 进行细胞靶向

• 批准号: 11132222
• 负责人: 鈴木 徹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11132222/
• 关键词: アンチセンスオリゴヌクレオチド; PNA; 無細胞タンパク質合成; 糖鎖-オリゴDNA複合体; GFP; CAT

アンチセンス法にペプチド核酸(PNA)を応用する為に、PNAとDNAの二重らせん形成能を、表面プラズモン共鳴法を用いて評価した。相補的なDNA、PNA及び、一塩基変異のあるDNAとPNAを用い、結合と解離の速度を表面プラズモン共鳴法で測定した。その結果、DNAにおいては一塩基の変異によって親和性(Ka/Kd)が50%ほど変化しか変化しないのに対し、PNAでは、97%も変化した。このことから、PNAは、わずかな塩基の違いをより強く認識できることが明らかになった。また、アンチセンスのターゲット配列を迅速に決定するため、GFPキメラタンパク質を用いたin vitroアンチセンス評価系を構築した。昨年度の本研究で、我々は緑色蛍光タンパク質(GFP)及び、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)を用いたアンチセンスオリゴDNAのin vitro評価系を構築した。今回は、これをキメラタンパク質にも、準用できるか否かを検討した。CAT遺伝子の下流に半減期が2時間になるように改変されたGFPを結合した遺伝子を構築した。上流のCAT遺伝子を制御するS-オリゴDNA及び、PNAをin vitroタンパク質合成系に加えたところCAT遺伝子単独の場合と同様にキメラ遺伝子が発現抑制されることが、GFPの蛍光強度として観察された。本実験系を用いることで、通常評価に時間とコストがかかる遺伝子に関して、ターゲット配列の決定を格段に容易にすることが可能になると考えられる。

The application of PNA to DNA synthesis and surface resonance was evaluated. Complementary DNA, PNA and PNA are measured by resonance method. The results showed that the affinity (Ka/Kd) of DNA was 50% higher than that of PNA, and 97% higher than that of DNA. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else. To quickly determine the distribution of the information in the vitro evaluation system In this study, we constructed an in vitro DNA evaluation system for green fluorescent protein (GFP) and CAT. Now, I'm going to ask you if you're going to be able to do that. CAT gene downstream half-time is 2 minutes, and GFP gene is constructed. The production of high-flow CAT genes requires the addition of S-Olig DNA and PNA in a vitro-based protein synthesis system. However, the detection of CAT genes can be suppressed in both cases and in the same way. Therefore, the fluorescent intensity of GFP can be observed. This system is usually used for evaluation of time and time, and it is easy to determine the allocation of time and time.