使用大肠杆菌开发真核细胞来源的离子转运膜蛋白活性表达系统-猫眼课题宝

使用大肠杆菌开发真核细胞来源的离子转运膜蛋白活性表达系统

批准号：

11132227

负责人：

魚住信之

金额：

$1.28万

依托单位：

Nagoya University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)

财政年份：

1999

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1999 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11132227/

关键词：

Na^+K^+トランスポーター AtHKT1 Arabidopsis 小麦 PhoA 大腸菌

项目摘要

项目成果

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1小麦Na^+K^+トランスポーター(wHKT1)のホモログ遺伝子をArabidopsisからクローン化して(AtHKT1)大腸菌で発現させた。wHKT1は大腸菌のK^+取り込み変異を相補しなかったが、AtHKT1は相補した。wHKT1が活性発現しなかった理由は明らかではない。次に、PhoAを用いたトポロジー解析を行った。更に、N末端についてはエピトープを導入して膜の内外について検討した。両者の方法からおおよそのトポロジー構造は決定できた。2マウスCa^<2+>チャネルの膜貫通構造を大腸菌PhoA法によって一部を決定した。3AtHKT1が発現した大腸菌のK^+取り込み変異株のK^+取り込み活性測定を原子吸光分析法によって測定した。この結果、AtHKT1が発現する大腸菌と相補性を示さない大腸菌のK^+取り込み速度を比較した場合、Km値はほぼ同一であったがVmaxが1.7倍程度大きくなっていた。一方、昨年度、植物K^+チャネル(KAT1およびAKT2)はK^+取り込み能を欠損した大腸菌を相補することを見いだしたが、K^+の取り込みは測定できなかった。パッチクランプ測定可能な大きさに大腸菌を巨大化し、大腸菌の細胞膜を対象に電気生理学的手法でK^+電流を測定することを試みた。K^+電流が観察されたが、今後、本電流はKAT1由来であることを数多くの実験で検証する必要があると考えている。

期刊论文(3)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

UOZUMI et al.: "The Arabidopsis HKT1 gene homologue mediates in ward Na^+ currents in Xenopus oocytes and Na^+ uptake in Saccharomyces cerevisiae"Plant Physiology. (in press). (2000)

UOZUMI等人：“拟南芥HKT1基因同源物介导非洲爪蟾卵母细胞中的Na + 电流和酿酒酵母中的Na + 吸收”植物生理学。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

中村辰之助、魚住信之: "動植物と細菌のカチオン輸送系の接点"蛋白質核酸酵素. 44・13. 1988-1995 (1999)

中村龙之助、鱼住伸行：“动物、植物和细菌中的阳离子传输系统的交叉点”蛋白质核酸酶 44・13（1999）。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

魚住信之: "真核生物のイオン輸送体を大腸菌で解析する"生物工学会誌. 77・12. 502-505 (1999)

鱼住伸之：“使用大肠杆菌的真核离子转运蛋白的分析”日本生物工程学会杂志77・12（1999）。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

塩害から種子形成を守るナトリウム輸送体の協奏的機構の探究

批准号：

24H00495
项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
资助金额：

$23.88万
财政年份：

2024
负责人：

魚住信之
依托单位：

Tohoku University

Functional expression system for plant ion transport system in Escherichia. coli

批准号：

21K19060
项目类别：

Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
资助金额：

$4.08万
财政年份：

2021
负责人：

魚住信之
依托单位：

Tohoku University

Study on the molecular mechanism of Ca signaling mediated by plant K channels

批准号：

20KK0127
项目类别：

Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
资助金额：

$11.9万
财政年份：

2020
负责人：

魚住信之
依托单位：

Tohoku University