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植物の塩および酸化ストレスに関与する膜輸送系の分子解析

参与植物盐和氧化应激的膜运输系统的分子分析

基本信息

批准号：
02F00677
负责人：
魚住信之
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

植物シロイヌナズナのK^+チャネルのKAT1とAKT2の両者はともに6回の膜貫通構造を有しており、その膜貫通構造を形成する領域のアミノ酸配列は似ている。KAT1はK^+を内向きに(取り込む方向)のみ透過する輸送体であるが、AKT2はK^+を内と外の両向きに透過する輸送体である。ところがKAT1は酵母の原形質膜のK^+輸送体の変異を相補し、AKT2は相補しない。このことからKAT1は原形質膜、AKT2は細胞内小器官の膜に発現していると考えられる。しかし、その細胞内局在性が分かっていない。本研究では、KAT1とAKT2の細胞内局在性を明らかにするために、酵母にGFP融合蛋白質を発現させて顕微鏡観察を行う。昨年度作成したKAT1とAKT2のキメラ蛋白質にGFPを融合した蛋白質を酵母で発現するために、酵母発現用ベクターに本遺伝子を挿入し、酵母に導入したところ、シグナルが細胞内の一部にシグナルの固まりが観察された。細胞膜からのシグナルも観察されたが、有意に局在性を示していないことから、明確な結果は得られなかった。同様にタバコ培養細胞においても明確な結果は得られなかった。一方、植物シロイヌナズナのK^+チャネルのKCO2についても同様の観察を行った。KCO2をAgrobacteriumによる形質転換により植物シロイヌナズナで発現させ顕微鏡観察したが結論は出なかった。現在、植物培養細胞を用いて一過的発現を検討している。

KAT1 and AKT2 of the K^++ cell of the plant are arranged in the same way as the 6-loop membrane through structure. KAT1 and AKT2 are both inward and outward. KAT1 and AKT2 complement each other in the variation of K^+ transporter in protoplast of yeast. KAT1 and AKT2 are found in protoplasma membrane and membrane of intracellular small organs. The cellular structure is divided into two parts. In this study, we investigated the intracellular localization of KAT1 and AKT2 in yeast and GFP fusion protein. In the past year, KAT1 and AKT2 have been prepared for protein fusion, protein development, yeast development, gene introduction, yeast introduction, and cell culture. The cell membrane is open to the outside world, and the results are clear. The results of the same culture are clear. A square, a plant, a plant. KCO2 is an Agrobacterium. It's a plant. It's a plant. It's a microscopical study. Now, plant culture cells have been used for a long time.