非ストレス負荷ヒト癌細胞におけるCa^<++>依存性ユビキチン化を介する野生型p53の分解とその抑制機構

非应激人类癌细胞中野生型 p53 的降解及其通过 Ca^++ 依赖性泛素化的抑制机制

• 批准号: 11140223
• 负责人: 中島 琢磨
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140223/
• 关键词: p53; ユビキチン; Ca^<++>依存型; Mdm2; UbcH5; ストレス; 癌; E2F

非ストレス負荷ヒト癌細胞では、細胞の増殖を抑制しさらに細胞死を誘導する野生型p53のレベルは主に分解系により抑制されている。p53の分解に関与する内在性因子としてはユビキチンリガーゼ(E3)Mdm2とユビキチン結合酵素(E2)UbcH5を含むユビキチン系、Ca^<++>依存性蛋白分解酵素カルパインが報告されている。しかしMdm2、UbcH5はそれぞれp53誘導性およびストレス誘導性で、非ストレス負荷細胞では発現レベルが極めて低く、カルパインはストレスの負荷に関わらず活性が低い。これに対し我々が先に報告したCa^<++>依存性のp53ユビキチン化は非ストレス負荷細胞で著しく強い。従って非ストレス負荷細胞ではCa^<++>依存性ユビキチン系が野生型p53の主要な分解系と推定される。本年度はこのユビキチン系酵素群の検索、当該ユビキチン系の活性を抑制する機構の検索を行い、以下の諸点を明らかにした。1.p53欠失ヒト培養細胞(Saos-2株)抽出液中の野生型p53に対するCa^<++>依存性ユビキチン化の活性は、野生型p53発現細胞(KB株)に比べ極めて微弱である。2.細胞抽出液中での野生型p53のユビキチン化は、細胞へのストレス負荷に関わらずユビキチン結合酵素UbcH5の添加によって促進される。3.ユビキチンリガーゼの内SCF、VCB-like両複合体ファミリーは野生型p53のCa^<++>依存性ユビキチン化に関与する可能性は低いと推定される。4.p53のCa^<++>依存性ユビキチン化が、Ca^<++>依存性に起こるp53の脱リン酸化とユビキチン化という2段階に分離するかどうか検討したが、現時点では分離できることを示唆する結果は得られていない。5.p14^<ARF>の発現誘導に関与すると推定されるE2F1、および新規HLH型E2F1結合因子E2FBP1の高発現はCa^<++>依存性p53ユビキチン化を相加的に抑制する。

Non-invasive tumor cells, cell colonies, inhibition of cell death, induction of wild-type p53, tumor cell, main decomposition system, inhibition of cell death, cell death and cell death. The combination of p53 proteolytic enzyme and internal factor (E3) Mdm2 proteolytic enzyme (E3) UbcH5 protein containing enzyme (E2), Ca ^ & lt;++> dependent proteolytic enzyme was reported in this paper. Mdm2, UbcH5, p53, sex, p53, p53. Please tell me that the first report is about the dependence of lt;++> on p53. The main decomposition system of wild-type p53 is the presumptive decomposition of wild-type p53, which is dependent on Ca ^ & lt;++>. This year, the system is related to the enzyme group, and when the system is active to control the operation of the system, the following information is required. 1.p53 lost the activity of wild-type p53 cells (Saos-2 strain) and wild-type p53 cells (KB strain) in the extract of wild-type p53 cells (KB strain). two。 In the cell extract, the wild type p53 gene was purified, and the enzyme UbcH5 was added to promote the growth of the cell. 3. The combination of SCF, VCB-like, and wild-type p53 Ca ^ & lt;++> dependencies is known to have low probability and low probability. 4.p53

项目成果

Takeuchi, A., et al.: "Enhancer and silencer binding proteins involved in the rat cdc2 promoter activation at the G1/S boundary"Genes to Cells. 4. 229-242 (1999)

Takeuchi, A. 等人：“增强子和沉默子结合蛋白参与大鼠 cdc2 启动子在 G1/S 边界的激活”《基因到细胞》。

Ohi, N., et al.: "A novel adenovirus E1B19K-binding protein B5 inhibits apoptosis induced by Nip3 by forming a heterodimer through the C-terminal hydrophobic region"Cell Death & Differentiation. 6. 314-325 (1999)

Ohi, N. 等人：“一种新型腺病毒 E1B19K 结合蛋白 B5 通过 C 端疏水区形成异二聚体来抑制 Nip3 诱导的细胞凋亡”细胞死亡

Shirasuna, K., et al.: "The G10BP-1 gene encoding GC box binding protein, is a target of Myc and Jun/Fos"Genes to Cells. 4. 277-289 (1999)

Shirasuna, K. 等人：“编码 GC 盒结合蛋白的 G10BP-1 基因是 Myc 和 Jun/Fos”基因对细胞的靶标。

Yageta, M., et al.: "The adenovirus E1A domains required for induction of DNA replication in G2/M arrested cells coincide with those required for apoptosis"Oncogene. 18. 4767-4776 (1999)

Yageta, M., 等人：“在 G2/M 停滞细胞中诱导 DNA 复制所需的腺病毒 E1A 结构域与细胞凋亡所需的结构域一致”。

Tsunoda, H., et al.: "Effect of wild-type and mutated p53 and Id proteins on the induction of apoptosis by adenovirus E1A, c-myc, bax, and nip3 in p53 null mouse cerebellum cells"Biochem. Biophys. Res. Commum.. 255. 722-730 (1999)

Tsunoda, H. 等人：“野生型和突变型 p53 和 Id 蛋白对腺病毒 E1A、c-myc、bax 和 nip3 在 p53 缺失小鼠小脑细胞中诱导细胞凋亡的影响”Biochem。