非ストレス負荷ヒト癌細胞におけるCa^<++>依存性ユビキチン化を介する野生型p53の分解とその抑制機構

非应激人类癌细胞中野生型 p53 的降解及其通过 Ca^++ 依赖性泛素化的抑制机制

• 批准号: 11140223
• 负责人: 中島 琢磨
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140223/
• 关键词: p53; ユビキチン; Ca^<++>依存型; Mdm2; UbcH5; ストレス; 癌; E2F

非ストレス負荷ヒト癌細胞では、細胞の増殖を抑制しさらに細胞死を誘導する野生型p53のレベルは主に分解系により抑制されている。p53の分解に関与する内在性因子としてはユビキチンリガーゼ(E3)Mdm2とユビキチン結合酵素(E2)UbcH5を含むユビキチン系、Ca^<++>依存性蛋白分解酵素カルパインが報告されている。しかしMdm2、UbcH5はそれぞれp53誘導性およびストレス誘導性で、非ストレス負荷細胞では発現レベルが極めて低く、カルパインはストレスの負荷に関わらず活性が低い。これに対し我々が先に報告したCa^<++>依存性のp53ユビキチン化は非ストレス負荷細胞で著しく強い。従って非ストレス負荷細胞ではCa^<++>依存性ユビキチン系が野生型p53の主要な分解系と推定される。本年度はこのユビキチン系酵素群の検索、当該ユビキチン系の活性を抑制する機構の検索を行い、以下の諸点を明らかにした。1.p53欠失ヒト培養細胞(Saos-2株)抽出液中の野生型p53に対するCa^<++>依存性ユビキチン化の活性は、野生型p53発現細胞(KB株)に比べ極めて微弱である。2.細胞抽出液中での野生型p53のユビキチン化は、細胞へのストレス負荷に関わらずユビキチン結合酵素UbcH5の添加によって促進される。3.ユビキチンリガーゼの内SCF、VCB-like両複合体ファミリーは野生型p53のCa^<++>依存性ユビキチン化に関与する可能性は低いと推定される。4.p53のCa^<++>依存性ユビキチン化が、Ca^<++>依存性に起こるp53の脱リン酸化とユビキチン化という2段階に分離するかどうか検討したが、現時点では分離できることを示唆する結果は得られていない。5.p14^<ARF>の発現誘導に関与すると推定されるE2F1、および新規HLH型E2F1結合因子E2FBP1の高発現はCa^<++>依存性p53ユビキチン化を相加的に抑制する。

Non ス ト レ ス load ヒ ト cancer で は を inhibition, cell の raised colonization し さ ら に induced cell death を す る wild-type p53 の レ ベ ル は に decomposition is Lord に よ り inhibit さ れ て い る. P53 の decomposition に masato and す る internality factor と し て は ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ (E3) Mdm2 と ユ ビ キ チ ン combined with enzyme (E2) UbcH5 を containing む ユ ビ キ チ ン, Ca ^ < + + > dependence protein decomposing enzyme カ ル パ イ ン が report さ れ て い る. し か し Mdm2, UbcH5 は そ れ ぞ れ p53 induced お よ び ス ト レ ス induced で, non ス ト レ ス load cell で は 発 now レ ベ ル が め extremely low て く, カ ル パ イ ン は ス ト レ ス の load に masato わ ら が low い ず activity. こ れ に し seaborne I 々 が に report first し た Ca ^ < + + > dependency の p53 ユ ビ キ チ ン change は non ス ト レ で ス load cells with し く い. 従 っ て non ス ト レ ス load cell で は Ca ^ < + + > dependency ユ ビ キ チ ン department が wild-type p53 の main な decomposition of presumption と さ れ る. This year は こ の ユ ビ キ チ ン system enzyme group の 検 cable, when the ユ ビ キ チ ン is の inhibition す を る institutions の 検 cable line を い point, the following の を Ming ら か に し た. 1. P53 owe lost ヒ ト cultured cells (Saos - 2 strains) extract の wild-type p53 に す seaborne る Ca ^ < + + > dependency ユ ビ キ チ ン は の activity and wild-type p53 発 now cell (KB) strains に than べ extremely め て weak で あ る. 2. In the cell extract で の wild-type p53 の ユ ビ キ チ ン は, cell へ の ス ト レ ス load に masato わ ら ず ユ ビ キ チ ン combined with enzyme UbcH5 の add に よ っ て promote さ れ る. 3. ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ の SCF, VCB - like that struck complex フ ァ ミ リ ー は wild-type p53 の Ca ^ < + + > dependency ユ ビ キ チ ン change に masato and す る は unlikely い と presumption さ れ る. 4. P53 の Ca ^ < + + > dependency ユ ビ キ チ ン が, Ca ^ < + + > dependency に up こ る p53 の リ off ン acidification と ユ ビ キ チ ン change と い う 2-stage order に separation す る か ど う か beg し 検 た が, current で は separation で き る こ と を in stopping す る results ら は れ て い な い. 5. P14 ^ < ARF > の 発 now induced に masato and す る と presumption さ れ る E2F1, お よ び new rules HLH E2F1 combined with factor E2FBP1 の high 発 は Ca now ^ < + + > dependency p53 ユ ビ キ チ ン を addition of に inhibit す る.

项目成果

Takeuchi, A., et al.: "Enhancer and silencer binding proteins involved in the rat cdc2 promoter activation at the G1/S boundary"Genes to Cells. 4. 229-242 (1999)

Takeuchi, A. 等人：“增强子和沉默子结合蛋白参与大鼠 cdc2 启动子在 G1/S 边界的激活”《基因到细胞》。

Ohi, N., et al.: "A novel adenovirus E1B19K-binding protein B5 inhibits apoptosis induced by Nip3 by forming a heterodimer through the C-terminal hydrophobic region"Cell Death & Differentiation. 6. 314-325 (1999)

Ohi, N. 等人：“一种新型腺病毒 E1B19K 结合蛋白 B5 通过 C 端疏水区形成异二聚体来抑制 Nip3 诱导的细胞凋亡”细胞死亡

Shirasuna, K., et al.: "The G10BP-1 gene encoding GC box binding protein, is a target of Myc and Jun/Fos"Genes to Cells. 4. 277-289 (1999)

Shirasuna, K. 等人：“编码 GC 盒结合蛋白的 G10BP-1 基因是 Myc 和 Jun/Fos”基因对细胞的靶标。

Yageta, M., et al.: "The adenovirus E1A domains required for induction of DNA replication in G2/M arrested cells coincide with those required for apoptosis"Oncogene. 18. 4767-4776 (1999)

Yageta, M., 等人：“在 G2/M 停滞细胞中诱导 DNA 复制所需的腺病毒 E1A 结构域与细胞凋亡所需的结构域一致”。

Tsunoda, H., et al.: "Effect of wild-type and mutated p53 and Id proteins on the induction of apoptosis by adenovirus E1A, c-myc, bax, and nip3 in p53 null mouse cerebellum cells"Biochem. Biophys. Res. Commum.. 255. 722-730 (1999)

Tsunoda, H. 等人：“野生型和突变型 p53 和 Id 蛋白对腺病毒 E1A、c-myc、bax 和 nip3 在 p53 缺失小鼠小脑细胞中诱导细胞凋亡的影响”Biochem。