AAAプロテアーゼFtsHの構造と機能に関する研究

AAA蛋白酶FtsH的结构与功能研究

• 批准号: 11144233
• 负责人: 小椋 光
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144233/
• 关键词: ATPase; プロテアーゼ; 膜タンパク質; 分子シャペロン; ストレス応答; 胞子形成; コンピューターモデリング; ヘリカーゼ

FtsH ATPaseの分子間触媒モデルを証明するため、さらに多数の変異体を構築し、それらの活性を調べるとともに、同じAAAファミリーに属するNSF-D2の結晶構造を基にFtsH ATPaseの立体構造モデリングを行った。その結果、分子間触媒モデルはさらに支持され、しかもATP加水分解に伴う構造変化がリング状FtsH ATPaseの中央の穴のサイズを制御するという可能性が示唆された。これは、基質タンパク質のプロテアーゼドメインへの移行反応がこの穴を通して起こり、ATP加水分解によって制御されるというモデルに分子基盤を与えるものである。この分子モデルは、FtsH ATPaseによるタンパク質のアンフォールディングやシャペロン活性についても重要な作業仮説であり、モデルから予測される重要部位の機能解析をさらに進めている。σ^<32>の分解におけるDnaKシャペロン系の役割について検討した結果、DnaKシャペロンがσ^<32>のRNAポリメラーゼへの結合を阻害することやFtsHプロテアーゼが局在する膜への移動に関わるという可能性は否定的で、DnaKシャペロンがσ^<32>に直接作用して、FtsHによる分解を受けやすい構造に変化させるという可能性が強く示唆されたが、これをin vitroで証明するには至っていない。可溶性FtsHの解析を行い、2番目の膜貫通領域がオリゴマー形成に必須であること、可溶性でもオリゴマーを形成できれば、σ^<32>など細胞質基質を分解できることを明らかにした。FtsHプロテアーゼの基質の一つである枯草菌のSpoVMが膜に作用し、細胞増殖に阻害効果を持つことを明らかにした。FtsH ATPaseと近縁なRuvBヘリカーゼのATPaseの機能ドメイン・機能残基の推定を行った。

FtsH ATPase の intermolecular catalytic モ デ ル を prove す る た め, さ ら に most の - variant を constructing し, そ れ ら の activity を adjustment べ る と と も に, with じ AAA フ ァ ミ リ ー に genus す る NSF - D2 の crystal structure を base に FtsH ATPase の three-dimensional structure モ デ リ ン グ を line っ た. そ の results, intermolecular catalytic モ デ ル は さ ら に support さ れ, し か も ATP hydrolysis に with う structure - the が リ ン グ shape FtsH ATPase の central の den の サ イ ズ を suppression す る と い が う possibility in stopping さ れ た. こ れ は, matrix タ ン パ ク qualitative の プ ロ テ ア ー ゼ ド メ イ ン へ の transitional anti 応 が こ の den を tong し て up こ り, ATP hydrolysis に よ っ て suppression さ れ る と い う モ デ ル に molecular base plate を and え る も の で あ る. こ の molecular モ デ ル は, FtsH ATPase に よ る タ ン パ ク qualitative の ア ン フ ォ ー ル デ ィ ン グ や シ ャ ペ ロ ン active に つ い て も important な homework 仮 said で あ り, モ デ ル か ら be さ れ る の important parts of the functional analytic を さ ら に into め て い る. Sigma ^ < > 32 の decomposition に お け る DnaK シ ャ ペ ロ ン cut is の service に つ い て beg し 検 た results, DnaK シ ャ ペ ロ ン が sigma ^ < > 32 の RNA ポ リ メ ラ ー ゼ へ の combining を resistance against す る こ と や FtsH プ ロ テ ア ー ゼ が bureau in す る membrane へ の mobile に masato わ る と い は negative で う possibility, DnaK シ ャ ペ ロ ン が sigma ^ < > 32 に direct action し て, FtsH に よ を る decomposition by け や す に い structure - the さ せ る と い う strong possibility が く in stopping さ れ た が, こ れ を in vitro で prove す る に は to っ て い な い. Soluble FtsH の parsing を い rows, 2 times eye の transmembrane domain が オ リ ゴ マ ー form に must で あ る こ と, soluble で も オ リ ゴ マ ー を form で き れ ば, sigma ^ < > 32 な ど を cytoplasmic matrix decomposition で き る こ と を Ming ら か に し た. FtsH プ ロ テ ア ー ゼ の matrix の a つ で あ る hay bacteria の SpoVM が membrane に に し, cells raised colonization resistance against unseen fruit を hold つ こ と を Ming ら か に し た. FtsH ATPase と nearly try な RuvB ヘ リ カ ー ゼ の ATPase の function ド メ イ ン presumption, functional residues の を line っ た.

项目成果

Makino, S.: "Second transmembrane segment of FtsH plays a role in its proteolytic activity and homo-oligomerization."FEMS Lett.. 460. 554-558 (1999)

Makino, S.：“FtsH 的第二跨膜片段在其蛋白水解活性和同源寡聚化中发挥作用。”FEMS Lett.. 460. 554-558 (1999)

Karata, K: "Dissecting the role of a conserved motif (the second region of homology) in the AAA family of ATPases: site-directecd mutagenesis of the ATP-dependent protease FtsH."J. Biol. Chem.. 274. 26225-26232 (1999)

Karata, K：“剖析 ATP 酶 AAA 家族中保守基序（第二同源区）的作用：ATP 依赖性蛋白酶 FtsH 的定点诱变。”J.