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分子シャペロンの基質認識とヌクレオチド加水分解活性

分子伴侣的底物识别和核苷酸水解活性

基本信息

批准号：
11153217
负责人：
河田康志
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153217/
关键词：
分子シャペロン GroEL 機能発現機構 ATP加水分解一分子安定性

项目摘要

大腸菌の熱ショック蛋白質として細胞内蛋白質の大きな立体構造変化に関与し,細胞機能に重要な役割を果たしているシャペロニンGroE(GroEL,GroES)の機能発現機構の詳細を明らかにするため,蛋白質工学的手法を駆使して,オリゴマー蛋白質であるGroESの構造安定性とGroELの基質認識とヌクレオチド加水分解活性に関わる機能発現機構に関して以下のような結果を得た。1.7量体からなるオリゴマー蛋白質GroESの安定性を評価するため,変性剤(塩酸グアニジン)中における挙動を蛍光スペクトル,ゲルろ過クロマトグラフィーで調べた。また,サブユニット間にトリプトファンを新たに導入した変異体を用いて同様に調べた結果,7量体のGroESは一度単量体に解離し,その後,変性していくという2段階反応であることが明らかになり,全体の構造安定性は,各サブユニットがオリゴマー化することによって主に維持されていることが分かった。2.蛋白質の構造形成を行うシャペロニンGroELの機能発現機構の詳細を解明するため,部位特異的変異導入法を用いて,3個のドメイン(頂上,中間,赤道ドメイン)にそれぞれ変異を導入した3種類の変異型GroELを作製し,その機能解析を行った。その結果,シャペロニンGroELの機能発現において,ATPの結合・加水分解と基質結合の情報伝達が重要であり,中でも特に,GroELの中間ドメインがその大きな役割を担っていることが明らかになった。3.GroELの基質認識の様子をβラクトグロブリンとロダニーズを基質蛋白質にして,それぞれの分子を蛍光色素でラベルにすることによって,一分子蛍光観に成功した。今後はこの系を用いて,分子シャペロンの機能発現機構を一分子で明らかに出来る事が判明した。

The three-dimensional structure of the intracellular protein of coliform bacteria is important for cell function. Details of the functional display mechanism of GroE (GroEL, GroES)するため, protein engineering technique を駆 make して, オリゴマーprotein であるGroES のstructural stability とGro The EL substrate recognizes the hydrolytic activity of the substrate and the functional development mechanism. The following results are obtained. 1.7 Measurement of the stability of the protein GroES and the stability of the protein GroESグアニジン)中における挙动を蛍光スペクトル,ゲルろ上クロマトグラフィーで调べた.また,サブユニット间にトリプトファンを新たに Import した変variantを用いて同様The result of the adjustment, the dissociation of the 7-dimensional body, the dissociation of the 7-dimensional body, and the change of the nature.くという2-stage reaction であることが明らかになり, the overall structural stability は, each サブユニットがオリゴマー化することによって main maintenance されていることが分かった. 2. Detailed explanation of protein structure formation mechanism and site-specific mutation introduction method, 3 piecesのドメイン(Top, Middle, Equator ドメイン) にそれぞれ変different を Import した 3 types of の変 special type GroEL を Production し, その Functional analysis を row った.そのRESULTS, シャペロニンGroEL の Functional Development において, ATP の Binding・Hydrolysis and Matrix Binding Information 伝达がIt's important, it's the middle one, it's the middle one, it's the middle part of GroEL. It's the big one. 3.GroEL matrix recognition matrix protein matrix proteinて,それぞれのmolecule を蛍光荳にでラベルにすることによって, a molecule of 蛍光観に successfullyした. From now on, the system will be used, and the function of the molecule will be revealed. When one molecule is revealed, the thing will be clearly understood.