HIV-1 Nefが関与する細胞機能因子の解析

HIV-1 Nef相关细胞功能因素分析

• 批准号: 11161235
• 负责人: 横田 恭子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161235/
• 关键词: HIV-1; Nef; ウィルス増殖

ウイルスの感染性に重要なN末の機能を解析するため、27-3kD Nef蛋白の7番目のアミノ酸に停止コドンを導入し、N末アミノ酸6個のみ残存するHIV(6AA-Nef)を作成した。既存のNef変異ウイルスは感染性が10分の1程度に低下するのに対し、このウイルスは感染性を全く喪失し、CEMに感染させても逆転写の初期の段階で阻害があることを明らかにした。このウイルスは20番目のメチオニンから読まれる25kD Nefを発現していることが示唆されたため、野生型および6AA-NefウイルスのNef遺伝子部分を発現ベクターに入れ換え、in vitro transcription/translation及びCOS細胞へのトランスフェクションで25kDの蛋白が作られることを確認した。そこで、25kD Nefも発現しないように2つめの変異を24番目のアミの酸遺伝子に導入したウイルスを作成し、これをCEMに感染させると、感染性は完全に回復することがわかった。従ってこの25kD Nef蛋白の存在が何らかの機構でウイルスの感染性を左右している可能性が考えられた。この機構を解明するため、恒常的に27kD Nefおよび25kD Nef蛋白を発現するCEM細胞を作成した。これらの細胞におけるCD4およびMHC class Iの発現をFACSで解析すると、27kD Nef発現CEMでは両方とも発現が低下しているのに対し、25kD Nef発現細胞では変化がなかった。従ってウイルス感染性および細胞表面抗原の発現抑制にはNefのN末が重要であることが明かとなった。

HIV infection is important for the analysis of the function of the N terminal, 27-3kD Nef protein in 7 parts of the acid to stop the introduction of the N terminal, N terminal acid in 6 parts of the residual HIV(6AA-Nef) to create. The infection rate of existing CEM is 10 points and 1 degree lower than that of existing CEM. The infection rate of existing CEM is 10 points and 1 degree lower than that of existing CEM. The infection rate of existing CEM is 10 points and 1 degree lower than that of existing CEM. The 25 kD Nef protein was found in the wild-type and wild-type Nef gene fragments, in vitro transcription/translation and COS cell lines. 25kD Nef can be found in the middle of the 24-point acid sequence, and the infectivity can be completely restored. The mechanism of the existence of the 25kD Nef protein and the possibility of its infectivity are examined. This mechanism is explained by the constant production of 27kD Nef protein and 25kD Nef protein. The expression of CD4 and MHC class I in these cells was analyzed by FACS, and the expression of CEM in 27 kD Nef cells was reduced. It is important to prevent the development of infectious diseases and cell surface antigens

项目成果

Tsunetsugu-Yokota Y.et al.: "Transcriptional regulation of HIV-1 LTR during antigen-dependent activation of primary T cells by dendritic cells"J.Leukocyte Biol.. (in press). (2000)

Tsunetsugu-Yokota Y.等人：“树突状细胞抗原依赖性激活原代 T 细胞期间 HIV-1 LTR 的转录调节”J.Leukativity Biol..（出版中）。