カニクイザルを用いた臍帯血または末梢血管細胞遺伝子治療の比較研究

食蟹猴脐带血或外周血管细胞基因治疗的比较研究

• 批准号: 11162220
• 负责人: 花園 豊
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11162220/
• 关键词: カニクイザル; 造血幹細胞; 遺伝子治療; レトロウイルスベクター; 遺伝子標識; GFP; 骨髄移植; 末梢血管細胞移植

(1)カニクイザル自家骨髄移植の系の樹立 : 我々は、本年度、カニクイザルを用いた自家骨髄移植の系を樹立した。カニクイザルから骨髄血を採取し、CD34+細胞を単離し、全身放射線照射(500cGyx2)を行ったサルに自家移植した(7頭)。この際、無菌室管理、中心静脈栄養、輸血、抗生剤投与を必要としたが、死亡例なくおおむね安全に行なうことができた。(2)カニクイザル末梢血幹細胞採取法(leukapheresis)の確立 : カニクイザル末梢血幹細胞移植法の樹立に向けて、本年度は、サイトカインによって末梢血へ動員された造血幹細胞採取を試みた(6頭)。これによって、末梢血からも骨髄血からとほぼ同じ量のCD34+細胞が採取可能であった。来年度から、末梢血幹細胞移植も開始する予定である。(3)カニクイザル造血幹細胞の遺伝子標識研究 : 次に、我々は、green fluorescent protein(GFP)を発現するレトロウイルスペクターを作製し、カニクイザル骨髄CD34+細胞へ遺伝子導入を行った。遺伝子導入したCD34+細胞を自家移植することにより、骨髄幹細胞の遺伝子標識実験を行った(5頭)。現在、最長で移植後9ヶ月になるが、骨髄前駆細胞の約2-20%がプロウイルス陽性であり、現在米国で行われている霊長類造血幹細胞遺伝子導入の効率とほぼ同じ水準に達している。ただし、GFP遺伝子を導入した場合、その遺伝子導入細胞は、末梢血中には出現しづらいこともわかった。現在、その原因がGFPの免疫原性によるものか、毒性によるものか調べている。いずれにせよGFPを霊長類に応用する場合には十分な注意が必要である。なお来年度から、末梢血幹細胞の遺伝子標識実験も開始する予定である。

(1)The establishment of a bone graft system: This year, the establishment of a bone graft system Bone marrow samples, CD34 + cells, whole body radiation (500 cGyx 2), and autotransplantation (7) were collected. The time, sterile room management, central venous maintenance, blood transfusion, antibiotic administration and necessary, death cases, safety, travel, etc. (2)Establishment of peripheral blood stem cell collection method: establishment of peripheral blood stem cell transplantation method, trial of peripheral blood stem cell mobilization (6 cases) this year Therefore, it is possible to collect the same amount of CD34 + cells from the peripheral blood, hand bones and blood. The next year, peripheral blood stem cell transplantation began. (3)Study on gene identification of hematopoietic stem cells: Second, we developed green fluorescent protein (GFP) to control the development of hematopoietic stem cells, and carried out gene introduction into hematopoietic stem cells CD34 +. CD34 + cell autotransplantation with gene introduction and gene identification of bone marrow stem cells (5) At present, the longest 9 months after transplantation, about 2 - 20% of bone marrow cells are positive, and the efficiency of long hematopoietic stem cell gene introduction in China is up to the same level. The GFP gene was introduced into the cells and the peripheral blood was found in the cells. Now, the reasons for this are GFP immunogenicity, toxicity, and modulation. It is necessary to pay attention to the situation In the future, the identification of peripheral blood stem cells will start at a predetermined time.

项目成果

Hanazono, Y. et al.: "In vino marking of rhesus monkey lymhocyted by adeno-associated viral vectors : direct comparison with retroviral vectors"Blood. 94. 2263-2270 (1999)

Hanazono, Y. 等人：“通过腺相关病毒载体对恒河猴淋巴细胞进行体外标记：与逆转录病毒载体的直接比较”血液。

KUME, A. et al.: "Hematopoietic stem cell gene therapy: a current overview."Int J Hematol. 69. 227-233 (1999)

KUME, A. 等人：“造血干细胞基因治疗：当前概述。”Int J Hematol。

Yu, J. -M. et al.: "Expression of interferon-γ by stromal cells inhibits murine long-term repopulating hematopoietic stem cell activity"Exp. Hematol.. 27. 895-903 (1999)

Yu, J. -M. 等人：“基质细胞表达干扰素-γ 抑制小鼠长期再生造血干细胞活性”Exp. 27. 895-903 (1999)

Hamazono Y. et al.: "Genetic marking, In Hematopoietic cell transplantation 2nd edition"Edited by Forman , S. J. , Blume, K. G. , and Thomas, E. D. Blackwell Science, Inc.. 8 (1999)

Hamazono Y.等人：“造血细胞移植中的基因标记，第 2 版”，由 Forman, S. J.、Blume, K. G. 和 Thomas, E. D. Blackwell Science, Inc. 编辑。8 (1999)