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カニクイザルを用いた造血幹細胞遺伝子治療のモデル実験

食蟹猴造血干细胞基因治疗模型实验

基本信息

批准号：
12036219
负责人：
花園豊
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成12年度は、カニクイザル造血幹細胞の自家移植の系を用いて、選択的増幅遺伝子の有用性を調べた。カニクイザル5頭から骨髄血CD34^+細胞を採取し、これらの細胞に対して4日間にわたってレトロウイルスベクターで遺伝子導入を行った。遺伝子導入細胞は、全身放射線照射(500cGy×2)によって骨髄を廃絶したサルに自家移植した。最初のサル(メス)では、移植後、血清中の内因性エストロゲンに反応して40%前後の造血前駆細胞(CFU-C)にプロウイルスが検出された。しかし移植半年後、プロウイルスをもつCFU-Cは5%まで低下した。そこでこのサルにエストロゲンの投与を開始した。その結果、外因性のエストロゲンに反応してプロウイルスをもつCFU-Cが再び増加し、約30%になった。また末梢血中の遺伝子導入細胞も10倍前後の増加(<0.1%から1%)が観察された。次の4頭では、骨髄CD34^+細胞を二分し、一方は選択的増幅遺伝子を発現するレトロウイルスベクターで遺伝子導入を行い、もう一方は非発現ベクターで遺伝子導入を行い、両者を同時に自家移植した。移植3-6ヶ月後、エストロゲンまたはタモキシフェンを投与した。4頭のうち2頭において末梢血の薬剤濃度が100nM以上に達した。これらのサルの末梢血中では、選択的増幅遺伝子の導入された細胞が10倍前後に増加した(<0.1%から1%)。一方、非発現ベクターで遺伝子導入された細胞数は変化しなかった。選択的増幅遺伝子をレトロウイルスベクターに組み込むと、エストロゲン投与によって遺伝子導入された造血細胞を、体内で選択的に増幅することが出来る。さまざまな治療用遺伝子をこの選択的増幅遺伝子と組み合わせることによって、治療用遺伝子を発現する造血細胞を体内で増やすことが可能になる。この方法は、造血幹細胞遺伝子治療の新しい可能性を拓くものと期待される。

In 2012, the use of autologous hematopoietic stem cell transplantation systems and the usefulness of selected genes were adjusted. The expression of CD34^+ cells was detected in the 5-cell culture medium, and the expression of CD34^+ cells was detected in the 4-cell culture medium. The cells introduced into the cells were irradiated with whole-body radiation (500cGy×2), and the bone marrow cells were transplanted into the cells. After transplantation, the endogenous growth factor in serum was detected before and after 40% of hematopoietic progenitor cells (CFU-C) were detected. Half a year after the transplant, the CFU-C of Pu Luoイルwas 5% lower. The first step is to open the door to the world. As a result, the number of CFU-C increased by about 30% due to exogenous factors. A 10-fold increase (<0.1% to 1%) in the number of DNA fragments introduced into the cells was observed. The next four CD34 + cells were divided into two groups, one group was selected for amplification, the other group was not selected for amplification, and the other group was transplanted simultaneously. After 3-6 months of transplantation, the number of patients was increased. 4. The concentration of the drug in the peripheral blood of the patient was above 100nM. The increase in the number of genes introduced into the peripheral blood increased by 10 times (<0.1%). The number of cells introduced into the cell was changed. The increase in the amplitude of the selected gene is due to the introduction of the gene into hematopoietic cells and the increase in the amplitude of the selected gene in vivo. In vivo growth of hematopoietic cells for therapeutic gene production is possible due to the increase in the amplitude of the selected gene and its combination. This approach is expected to open up new possibilities for hematopoietic stem cell gene therapy.