カニクイザルを用いた造血幹細胞遺伝子治療の前臨床試験

食蟹猴造血干细胞基因治疗的临床前研究

• 批准号: 13016215
• 负责人: 花園 豊
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13016215/
• 关键词: 造血幹細胞; 遺伝子治療; 選択的増幅遺伝子; レトロウイルスベクター; レンチウイルスベクター; SIVベクター; カニクイザル; 霊長類モデル

1.骨髄非破壊法による自家骨髄移植法の開発:サルを用いて検討した。サルの長管骨から骨髄を吸引し空きスペースを作り、そこに遺伝子導入した自家CD34^+細胞を直接戻す。この際、選択的増幅遺伝子を導入することによって、移植後、生着した造血幹細胞を増幅できるかどうか検討した。本年度は1頭のカニクイザルを用いて本法を試みたところ、移植細胞の生着が確認された。さらに頭数を重ねて検討を続けたい。2.選択的増幅遺伝子の改良:サルの造血細胞に対して毒性をもつ可能性のあるGFP遺伝子をベクターから取り除いた。また、選択的増幅遺伝子の分子スイッチにあたるエストロゲン受容体に点突然変異を導入することによって、内因性のエストロゲンに反応せずタモキシフェンなどの合成ステロイドにのみ反応する特異性の高い選択的増幅遺伝子を作成し、カニクイザルを用いてその有効性を試験した。一部のサルでは有効性が認められた。すべてのサルで有効性を得るためにはさらに強力な選択的増幅遺伝子の開発が必要であると思われた。3.SIVベクターによるサルの造血幹細胞への遺伝子導入:サル免疫不全ウイルス(SIV)ベクター等のレンチウイルスベクターは、その感染に際して細胞分裂を必要としない特徴がある。造血幹細胞は分裂頻度が低い上、分裂させると容易に分化してしまうため、細胞分裂を起こさなくても遺伝子導入できるレンチウイルスベクターはきわめて有望である。サルを用いる実験の予備的検討として、NOD/SCIDマウスへの移植の系を用いて、SIVベクターによってヒト造血幹細胞へ効率よく遺伝子導入するための条件を検討中である。

1. The development of bone graft transplantation: a new method of bone graft transplantation The cells were introduced directly into CD34 + cells. At this time, the selection of expanded gene introduction, post-transplantation, the generation of hematopoietic stem cells increased This year, the first batch of cells was tested and the growth of transplanted cells was confirmed The number of heads of the company is now in the middle of the discussion. 2. Improved amplification of selected genes: the possibility of detection of cytotoxicity in hematopoietic cells and GFP genes The molecular structure of the selected amplitude-increasing gene is changed suddenly in the receptor, and the intrinsic amplitude-increasing gene of the selected amplitude-increasing gene is produced and used in the receptor. A part of the problem is that there is a problem. It is necessary to develop a strong selection of genes in order to achieve this goal. 3. SIV gene introduction: SIV immune deficiency (SIV), etc., characteristics of cell division necessary at the time of infection. Hematopoietic stem cells divide more frequently, divide more easily, and divide more easily. Study on the preparation of stem cells for transplantation, NOD/SCID transplantation system, SIV transplantation efficiency and gene introduction conditions

项目成果

Hanazono, Y. et al.: "Gene transfer into nonhuman primate hematopoietic stem cells : implications for gene therapy"Stem Cells. 19. 12-23 (2001)

Hanazono, Y. 等人：“基因转移到非人灵长类造血干细胞中：对基因治疗的影响”干细胞。

Muramatsu, M. et al.: "Reversible integration of the dominant negative retinoid receptor gene for ex vivo expansion of hematopoietic stem/progenitor cells"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 285巻. 891-896 (2001)

Muramatsu，M.等人：“用于造血干细胞/祖细胞的体外扩增的显性负视黄醇受体基因的可逆整合”Biochem.Biophys.Res.285.891-896(2001)。

Kang E.M.et al.: "Persistent low-level engraftment of rhesus peripheral blood progenitor cells transduced with the Fanconi anemia C gene after conditioning with low-dose irradiation"Mol.Ther.. 3巻. 911-919 (2001)

Kang E.M.等人：“用范可尼贫血C基因转导的恒河猴外周血祖细胞在低剂量照射条件下持续低水平植入”Mol.Ther.. 3. 911-919 (2001)