刺激応答性DNA複合体を用いる遺伝子情報制御システム
使用刺激响应 DNA 复合物的遗传信息控制系统
基本信息
- 批准号:11167262
- 负责人:
- 金额:$ 2.5万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1999
- 资助国家:日本
- 起止时间:1999 至 2000
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
アンチセンス法は、標的mRNAに対するオリゴヌクレオチド(ODN)の特異的な相補鎖形成を利用した効果的な遺伝子治療法である。本研究では、このアンチセンスODNを様々な機能性高分子で複合化し、その薬理効果の制御と標的細胞へのターゲッティング法の開発を目的としている。今年度はODNと熱応答性ポリマーであるポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(PNIPAAm)との複合体を構築し、その性能評価を行った。mRNA上のリボソーム結合部位を標的配列とするアンチセンスODNを設計し、その3'末端をビニル化した。HPLC精製した後、これをNIPAAmモノマーとラジカル共重合反応させることにより、ODN/PNIPAAm複合体を得た。この複合体はNIPAAmホモポリマー同様に33℃で相転移することが確認された。ODN複合体にssDNA分解酵素(S1Nuclease)を添加したところ、複合体のヌクレアーゼ耐性は未修飾ODNと比較して明らかに向上していることが示された。次に、GFPをレポータージーンとするin vitro転写/翻訳システムによって、ODN複合体のアンチセンス効果を評価した。鋳型DNAに対して、モル比で0,10,100,そして1000倍となるように複合体を加え、27℃で発現を誘導したところ、GFPの発現は複合体の投与量に比例して効果的に抑制された。この現象は、ODNの塩基配列に特異的であり、Mismatch、Scramble配列ではその阻害効果が明らかに低下した。一方相転移温度以上(37℃)でインキュベートした場合、複合体による阻害効果は、未修飾ODNと比較して有意に低下した。つまり複合体の遺伝子発現阻害効果はODN末端に修飾されたPNIPAAmの相転移に制御されており、グロビュール化したPNIPAAm側鎖はODN-mRNAハイブリッドの形成を強く阻害することが示唆された。
The gene therapy method of gene therapy is based on the formation of specific complementary gene locks in target mRNA pairs (ODN) This study aims at the development of a novel method for the synthesis of functional polymers and the control of target cells. This year's ODN and thermal response complex (PNIPAAm) were constructed and evaluated. The binding sites on mRNA are labeled and arranged in the 3'end of the mRNA. After purification by HPLC, ODN/PNIPAAm complexes were obtained. The complex is NIPAAm and the phase shift is confirmed at 33℃ODN complex ssDNA cleavage enzyme (S1Nuclease) added to the complex, the complex is not resistant to ODN, the complex is not resistant to ODN. In addition, GFP gene expression was evaluated in vitro and in vivo. The ratio of DNA to GFP was 0, 10, 100, 1000 fold. The complex was induced at 27℃ and GFP was inhibited at 27℃. This phenomenon, ODN base alignment is specific, Mismatch, Scramble alignment is opposite to the impact of low When a phase shift temperature is higher than 37℃, the complex has a lower resistance than unmodified ODN. The inhibition of gene expression in the complex results from the inhibition of ODN terminal modification by PNIPAAm phase shift, and from the inhibition of PNIPAAm side lock by ODN-mRNA phase shift.
项目成果
期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
前田瑞夫: "遺伝子DNAをアフィニティーリガンドとする分離・計測法の進歩"分析化学. 48(10). 871-890 (1999)
Mizuo Maeda:“使用遗传 DNA 作为亲和配体的分离和测量方法的进展”分析化学 48(10)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Mizuo Maeda: "Synthesis and Characterization of Vinyl Polymer-Grafted DNA and Its AB-Type Block Conjugate with Native DNA Fragment."Polymer Journal. 31(11). 1109-1114 (1999)
Mizuo Maeda:“乙烯基聚合物接枝 DNA 及其与天然 DNA 片段的 AB 型嵌段缀合物的合成和表征。”聚合物杂志。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
前田瑞夫: "岩波講座「現代工学の基礎」第3巻前田瑞夫、「バイオ材料の基礎」"岩波書店. 158 (2000)
前田瑞夫:“岩波讲座“现代工程基础”第3卷前田瑞夫,“生物材料基础””岩波书店158(2000)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
M.Maeda: "Nano-organized Hybrid Systems Comprising DNA"Precision Polymers and Nano-Organized Systems. 329-332 (2000)
M.Maeda:“包含 DNA 的纳米组织混合系统”精密聚合物和纳米组织系统。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Mizuo Maeda: "Affinity Separation of messenger RNA by thermo-responsive polymer carrying oligo(dT)"Nucleic Acids Symposium Series. 42. 55-56 (1999)
Mizuo Maeda:“通过携带寡聚 (dT) 的热响应聚合物对信使 RNA 进行亲和分离”核酸研讨会系列。
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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平尾 元・ 矢野 湧暉 ・ 小川 敦司 ・ 前田 瑞夫 ・ 朝日 剛 ・ 座古 保
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