课题基金 / 基金详情

複合体・集合体を形成する複数の蛋白質の同時高発現系の開発

複合体・集合体を形成する複数の蛋白質の同時高発現系の開発
开发多种蛋白质形成复合物/聚集体的同时高表达系统
批准号：
11169227
负责人：
田嶋 正二
金额：
$2.3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 2000
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11169227/
关键词：
DNAメチルトランスフェラーゼPCNAバキュロウイルス複合体蛋白質高発現系DNAメチル化

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
本研究では、発現させる蛋白質の分子量に上限がなく、複数のcDNAを同時に発現させることが可能な、バキュロウイルス/昆虫細胞系を利用して、複数の蛋白質から成る複合体ないし集合体を同時高発現させて精製することを目指す。材料として、染色体DNAメチルトランスフェラーゼ、Dnmt1、とこれと相互作用するPCNA(proliferating cell nuclear antigen)を用いる。昨年度までに、Dnmt1とPCNAをそれぞれ単独で発現させる組み換え型ウイルスを作製し、培養昆虫細胞に感染・発現させたところ、発現が確認された。両蛋白質をコードするウイルスを同時に昆虫細胞に感染させて、発現の至適条件を探索し、発現させた。発現させたDnmt1とPCNAを超遠心、ゲル濾過により複合体の形成状態を解析したところ、細胞内では両蛋白質は複合体を形成していないことが明らかとなった。そこで、それぞれの蛋白質を単独で発現させ精製した。
英文摘要
本研究では、発現させる蛋白質の分子量に上限がなく、複数のcDNAを同時に発現させることが可能な、バキュロウイルス/昆虫細胞系を利用して、複数の蛋白質から成る複合体ないし集合体を同時高発現させて精製することを目指す。材料として、染色体DNAメチルトランスフェラーゼ、Dnmt1、とこれと相互作用するPCNA(proliferating cell nuclear antigen)を用いる。昨年度までに、Dnmt1とPCNAをそれぞれ単独で発現させる組み換え型ウイルスを作製し、培養昆虫細胞に感染・発現させたところ、発現が確認された。両蛋白質をコードするウイルスを同時に昆虫細胞に感染させて、発現の至適条件を探索し、発現させた。発現させたDnmt1とPCNAを超遠心、ゲル濾過により複合体の形成状態を解析したところ、細胞内では両蛋白質は複合体を形成していないことが明らかとなった。そこで、それぞれの蛋白質を単独で発現させ精製した。
期刊论文(3)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
J. Miyagawa: "Isolation of the novel cDNA of a gene of which expression is induced by a demethylating stimulus"Gene. 240. 289-295 (1999)
J. Miyakawa：“分离一种基因的新型 cDNA，该基因的表达是由去甲基化刺激物诱导的”基因。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
H. Kimura 他: "Xenopus maintenance-type DNA methyltransferase is accumulated and translocated into germinal vesicles of oocytes"Journal of Biochemistry. 125. 1175-1182 (1999)
H. Kimura 等人：“非洲爪蟾维持型 DNA 甲基转移酶积累并转移到卵母细胞的生发囊泡中”《生物化学杂志》125. 1175-1182 (1999)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Koichi Inano et al.: "Maintenance-type DNA methyltransferase is highly expressed in post-mitotic neurons and localized in the cytoplasmic compartment"Journal of Biochemistry. 128. 315-321 (2000)
Koichi Inano 等人：“维持型 DNA 甲基转移酶在有丝分裂后神经元中高度表达，并定位于细胞质区室”《生物化学杂志》。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
ヒストンの特異的な残基のメチル化修節がDNAメチル化活性に果たす役割の解析
  • 批准号：
    18657042
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.18万
  • 财政年份：
    2006
  • 负责人：
    田嶋 正二
  • 依托单位：
    Osaka University
ゲノムDNAのメチル化状態維持の分子機構に関する研究
  • 批准号：
    16021230
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.39万
  • 财政年份：
    2004
  • 负责人：
    田嶋 正二
  • 依托单位：
    Osaka University
マウスDNAメチルトランスフェラーゼの酵素学的研究
  • 批准号：
    04F02545
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $0.7万
  • 财政年份：
    2004
  • 负责人：
    田嶋 正二
  • 依托单位：
    Osaka University
ゲノムDNAのメチル化状態維持の分子機構に関する研究
  • 批准号：
    15023232
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.2万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    田嶋 正二
  • 依托单位：
    Osaka University
国内基金
海外基金
宿主细胞DNAJA4蛋白受LMBV PCNA招募对 病毒复制影响及机制研究
  • 批准号：
  • 项目类别：
    省市级项目
  • 资助金额：
    10.0万元
  • 批准年份：
    2025
  • 负责人：
    李蔚
  • 依托单位：
    暨南大学
hMOF 调控PCNA蛋白乙酰化及表达影响卵巢癌细胞对铂类药物敏感性的研究
  • 批准号：
  • 项目类别：
    省市级项目
  • 资助金额：
    --
  • 批准年份：
    2025
  • 负责人：
    徐苏龙
  • 依托单位：
幽门螺杆菌通过USP1/PCNA分子轴介导的有氧糖酵解促进胃癌恶性进展的作用和机制研究
  • 批准号：
    2025JJ80837
  • 项目类别：
    省市级项目
  • 资助金额：
    --
  • 批准年份：
    2025
  • 负责人：
    白飞
  • 依托单位：
    湖南省肿瘤医院
DTX1 通过泛素化降解 PCNA 调控肝癌细胞增殖的机制研究