染色体DNAのメチル化状態を規定する因子の機能領域構造の解析

染色体DNA甲基化状态决定因素的功能区结构分析

• 批准号: 12034213
• 负责人: 田嶋 正二
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12034213/
• 关键词: DNAメチル化; DNAメチルトランスフェラーゼ; メチル化DNA結合蛋白質; 領域構造

脊椎動物の染色体DNAではCpG配列中のシトシンはしばしばメチル化修飾を受けており、発生段階・組織に特徴的なメチル化模様を示す。DNAのメチル化は、組織特異的な遺伝子の発現、遺伝子刷込、X染色体の不活性化、胚発生などの現象に深く関わっている。染色体DNAのメチル化模様は、DNAのメチル化を触媒する各種のDNAメチルトランスフェラーゼである、Dnmt1、Dnmt3aとDnmt3bにより書き込まれている。各種Dnmtとその他のDNAメチル化状態規定因子を発現・精製し、その機能領域構造を明らかにすることを目指す。Dnmt1(分子量180k)はC末端側40kDaにメチル化触媒領域を、N末端側に大きな「調節領域」と考えられる領域をもっている。N末領域のサブドメイン構造を明らかにする目的で、Dnmt1を培養昆虫細胞で高発現させ精製した。プロテアーゼに耐性を示す断片を解析した結果、プロテアーゼ耐性を示す36kDa領域の存在を示した。Dnmt3a、3bの機能領域構造を明らかにするために、昆虫細胞で高発現させ精製した。Dnmt3a、3bいずれもde novoのメチル化活性を示した。メチル化DNA結合領域をもつMBD4はT:Gミスマッチ認識グリコシラーゼ活性を合わせもつ。この分子を大腸菌で発現・精製して活性を調べた。cDNAを単離する過程で、脳組織に特異的なスプライシング・アイソフォームを見出した。この欠失領域はグリコシラーゼ触媒領域のすぐ上流に位置し、種間で良く保存されていた。

The chromosomal DNA of vertebrates is characterized by CpG sequences and molecular modifications. DNA degeneration, tissue-specific gene development, gene mutation, X chromosome inactivation, embryo development are closely related phenomena. Chromosome DNA transformation, DNA transformation catalyst, various DNA transformation, Dnmt1, Dnmt3a and Dnmt3b The development, refinement and functional domain structure of various DNMTs Dnmt1 (molecular weight 180k) has a large catalytic domain on the C-terminal side and a large regulatory domain on the N-terminal side. The structure of N-terminal insect cells was studied for the purpose of purification and purification. The results of the analysis showed that there was a 36kDa domain. Dnmt3a, 3b functional domain structure, insect cells are highly refined Dnmt3a and 3b are displayed in the middle of the novel. DNA binding domain: MBD4: T:G: T: T: This molecule is produced, refined and activated by E. coli. The cDNA sequence is expressed in tissue-specific proteins. The missing area is located in the upper part of the catalyst area, and the species are well preserved.

项目成果

Koichi Inano et al.: "Maintenance-type DNA methyltranoferase is highly expressed in post-mitotic neurono and localized in the cytoplasmic compartment"Journal of Biochemistry. 128. 315-321 (2000)

Koichi Inano 等人：“维持型 DNA 甲基转移酶在有丝分裂后神经元中高度表达，并定位于细胞质区室”《生物化学杂志》。