がん化因子としての染色体DNAメチル化の調節機構の研究

染色体DNA甲基化致癌因素调控机制研究

• 批准号: 12213075
• 负责人: 田嶋 正二
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213075/
• 关键词: DNAメチル化; DNAメチルトランスフェラーゼ; アフリカツメガエル; 相互作用因子; アポトーシス

近年、塩基配列の変化では説明できない、エピジェネティックな効果に起因するがんの発症例が注目されている。このエピジェネティックで括られる要因の多くが染色体DNAのメチル化異常に起因することがわかってきつつある。脊椎動物における染色体DNAのシトシン塩基5位のメチル化は遺伝情報の発現制御に関わっているが、その動的なメチル化変化は、模様の新生、維持、消去という3段階にわけられる。各段階を調節する因子として、現在DNAメチルトランスフェラーゼ(Dnmt)が3種類(Dnmt1とDnmt3a、3b)と各種のメチル化DNA結合蛋白質が同定されている。Dnmt1は、複製直後のヘミメチル化DNAを選択的にメチル化し、Dnmt3aと3bはDNAのメチル化模様を新たに創り出すde novoのDNAメチル化活性を触媒すると考えられている。本研究計画ではDNAのメチル化の調節機構を明らかにするために、DNAメチルトランスフェラーゼ(Dnmt)の調節機構を明らかにすることを目指すが、本年度は次のような結果を得た。ツメガエル胚にDnmt3bを高発現させると、発現領域の細胞にアポトーシスが誘起された。このアポトーシス誘起の責任領域はDnmt3bのC末端側の触媒領域に存在する。Dnmt3bによるアポトーシス誘起は内在的なDnmt3bと相互作用する因子が外来性のDnmt3bによって系から除外されたことによると推定される。酵母two-hybrid法により、Dnmt1と相互作用する新規遺伝子F1を同定した。このF1の翻訳産物は、Dnmt1のN末端100アミノ酸を含む配列と相互作用することを示した。Dnmt3aとDnmt3bをGSTとの融合蛋白質として発現・精製した。精製酵素標品はin vitroでde novoの活性を示した。いずれの酵素もCpG配列に高い特異性を示した。

In recent years, the change of the basic arrangement has been explained, and the causes of the disease have been noticed. The main causes of chromosomal DNA abnormalities are: Vertebrate chromosome DNA is composed of 5-position, 5-position, 5-position, 5- There are three kinds of DNA binding proteins (Dnmt1, Dnmt3a, Dnmt 3b) and various kinds of DNA binding proteins. Dnmt1, Dnmt3a, Dnmt 3b, Dnmt3a This research project aims to clarify the regulatory mechanism of DNA metabolism and DNA metabolism (Dnmt), and to obtain the second results of this year. Dnmt3b is a highly developed cell in the discovery domain. The area of responsibility induced by this reaction is the catalytic area on the C-terminal side of Dnmt3b. Dnmt 3b is a natural and natural interaction factor, except for exogenous Dnmt 3b. Yeast two-hybrid method, Dnmt1, interaction, new gene F1 The F1 protein was found to interact with the N-terminal 100 amino acid of Dnmt1. Dnmt3a and Dnmt3b are fusion proteins developed and refined. Refined enzyme standards are in vitro and novel. In the middle of the enzyme CpG sequence high specificity

项目成果

Koichi Inano et al.: "Maintenance-type DNA methyltransferase is highly expressed in post-mitotic neurons and localized in the cytoplasmic compartment"Journal of Biochemistry. 128. 315-321 (2000)

Koichi Inano 等人：“维持型 DNA 甲基转移酶在有丝分裂后神经元中高度表达，并定位于细胞质区室”《生物化学杂志》。