試験管内進化法による光応答性機能高分子の合成

体外进化法合成光响应功能聚合物

• 批准号: 11875206
• 负责人: 伊藤 嘉浩
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11875206/
• 关键词: 試験管内進化法; 光応答性; アゾベンゼン; ヌクレオチド; in vitro転写; RNAポリメラーゼ; PCR; ターゲット分子; 核酸; アゾベンセン; 核酸ライブラリー; 光; 触媒活性

光応答性官能基含有ヌクレオチドの合成とそれを用いた光異性化反応とPCR法、in vitro転写法を用いてランダムオリゴマーの作製検討を行った。まず、5-iodouridineに対してピリミジン環の5位にスペーサーとしてアリルアミン単位を導入し、その後アミド結合を介してアゾベンゼン単位を導入した。最後にリボースの1級水酸基を3リン酸化し、望む光応答性官能基含有ウリジン3リン酸(AzBn-UTP)を合成することができた。また同様の方法で光応答性官能基含有デオキシウリジン3リン酸(AzBn-dUTP)を合成した。次に合成中間体として得ることのできるアゾベンゼン含有ウリジン1リン酸(AzBn-UMP)を用いて光異性化の検討を行った。通常ではアゾベンゼンはおよそトランス:シス=9:1の組成であったが、0.06mM(D_2O)スケールで375nmのUVを照射することによりおよそ90分でトランス:シス=2:8に異性化した。これはNMRとUVスペクトルの15分おきの経時変化から確認できた。最後に、合成したAzBn-UTPを用いてin vitro転写を検討した。鋳型としてN50のランダムDNA配列を用い、T7、SP6、T3RNAポリメラーゼで各々検討したが、非天然であるAzBn-UTPは転写されなかった。現在より効率のよい転写条件を検討中である。またAzBn-dUTPの対してのPCR法への適用も検討中である。

Light 応 functionality, contains a sex ヌ ク レ オ チ ド の synthetic と そ れ を with い た subjects light anti 応 と PCR method, the in vitro planning writing を with い て ラ ン ダ ム オ リ ゴ マ ー の cropping 検 line for を っ た. ま ず, 5 - iodouridine に し seaborne て ピ リ ミ ジ ン ring の five に ス ペ ー サ ー と し て ア リ ル ア ミ ン 単 を import し, そ の after ア ミ ド combining を interface し て ア ゾ ベ ン ゼ ン 単 a を import し た. Finally に リ ボ ー ス の grade 1 water acid base を 3 リ ン acidification し, む light 応 functionality, contains a sex ウ リ ジ ン 3 リ ン acid (AzBn - UTP) を synthetic す る こ と が で き た. Youdaoplaceholder0 The same <s:1> method で light 応 functional groups containing デ キシウリジ キシウリジ リ 3リ <e:1> acid (AzBn-dUTP)を synthesize た た. Time に intermediates と し て have る こ と の で き る ア ゾ ベ ン ゼ ン contains ウ リ ジ ン 1 リ ン acid (AzBn - UMP party) を い て light subjects の 検 line for を っ た. Usually で は ア ゾ ベ ン ゼ ン は お よ そ ト ラ ン ス : シ ス = 9:1 of の で あ っ た が, 0.06 mM (D_2O) ス ケ ー ル で 375 nm の を UV irradiation す る こ と に よ り お よ そ 90 で ト ラ ン ス : シ ス = 2:8 に subjects し た. Youdaoplaceholder2 れ れ NMRとUVスペ ト ト ト <s:1> 15 points お <s:1> time-invariant ら ら confirm で た た た. Finally, に, synthesize を検 たAzBn-UTPを write を検 in に てin vitro転 to ask for た た. Where type と し て N50 の ラ ン ダ ム DNA match by い を, T7 has, SP6, T3RNA ポ リ メ ラ ー ゼ で each 々 beg し 検 た が, unnatural で あ る AzBn - UTP は planning write さ れ な か っ た. Now, よ よ is effective in <s:1> よ 転 転 転 write the conditions を検 in である. Youdaoplaceholder0 AzBn-dUTP <s:1> is applicable to <s:1> 検 である for the PCR method へ <e:1>.

项目成果

N.Teramoto,Y.Imanishi,Y.Ito: "In vitro selection of a ligase ribozyme carrying alkylamino groups in the side chains"Bioconj.Chem.. 11. 741-743 (2000)

N.Teramoto，Y.Imanishi，Y.Ito：“在侧链中携带烷基氨基的连接酶核酶的体外选择”Bioconj.Chem.. 11. 741-743 (2000)

E.Fukusaki,T.Kato,N.Kawazoe,Y.Ito: "DNA aptamers that bind to chitin"Bioorg.Med.Chem.Lett.. 10. 423-425 (2000)

E.Fukusaki、T.Kato、N.Kawazoe、Y.Ito：“与几丁质结合的 DNA 适体”Bioorg.Med.Chem.Lett.. 10. 423-425 (2000)

H.Zhang,A.Hamasaki,E.Toshiro,S.Aoyama,Y.Ito: "Nucleic Acids Symp.Ser."Automated in vitro selection to obtain oligonucleotides. 200 (2000)

H.Zhang，A.Hamasaki，E.Toshiro，S.Aoyama，Y.Ito：“核酸Symp.Ser.”自动体外选择以获得寡核苷酸。

Y.Ito: "In vitro selected oligonucleotides as receptors in a binding assay"Method Enzymol.. (印刷中). (2000)

Y.Ito：“在结合测定中体外选择寡核苷酸作为受体”Method Enzymol..（出版中）。

川添直輝,伊藤嘉浩: "コンビナトリアル化学による高分子触媒の新展開"高分子加工. 49. 57-65 (2000)

Naoki Kawazoe、Yoshihiro Ito：“通过组合化学开发聚合物催化剂”聚合物加工 49. 57-65 (2000)。