Development of binding growth factor by bioorthogonal approach

通过生物正交方法开发结合生长因子

• 批准号: 15F15054
• 负责人: 伊藤 嘉浩
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15F15054/
• 关键词: 上皮成長因子; インスリン様成長因子－1; 血管内皮細胞成長因子; 骨形成タンパク質; ３、４－ジヒドロキシフェニルアラニン; 成長因子; タンパク質工学; バイオ直交化学

成長因子として、上皮成長因子(EGF)、インスリン様成長因子－1(IGF－1)、血管内皮細胞成長因子（VEGF)、骨形成タンパク質（BMP)を選び、これにムール貝が分泌する水中接着タンパク質に含まれる３、４－ジヒドロキシフェニルアラニン(DOPA)を含むペプチドを導入し、基材への結合性の付与、結合状態での細胞活性化促進能を評価した。まずEGFやIGF-1は分子量が5000程度と低いため、ペプチド合成法での調製を行った。できるだけ短いEGFやIGF-1の活性を担う領域を用意し、そのアミノ末端にリジンとDOPAの交互配列ペプチドを導入した。合成したペプチドは、ポリスチレンのような有機材料にも、チタンのような金属材料にも、特にアルカリ性条件下で強い結合性を示した。このようにEGFやIGF-1が結合した表面は、高い細胞成長促進能を発揮した。次にVEGFやBMPへの導入を行った。これらは分子量が高いため、全長のペプチド合成は困難である。そこで、遺伝子組み換えと酵素法を用いたバイオ直交法を用いた。一つは、チロシナーゼを用いる方法で、チロシンとリジンの交互配列を遺伝子組み換えで新たに導入し、その後、チロシナーゼでのDOPA導入を行った。もう一つはソルターゼを用いる方法で、これは、ライゲーション配列を含んだタンパク質を遺伝子組み換えで、DOPAを含んだペプチドを固相法で合成し、これらをソルターゼでライゲーションするものである。このように調製したDOPA導入タンパク質は、アルカリ性条件下で金属への高い結合能をもち、結合状態で溶解状態より高い細胞活性化促進能を持つことがわかった。この他に、DOPAやドーパミンを用いた鋳型重合を試み、これらに含まれる３、４－ジヒドロキシフェニル基の重要性を明らかにした。

Growth factor-1, epithelial growth factor (EGF), growth factor-1 (IGF-1), vascular endothelial growth factor (VEGF), bone formation factor-1 (BMP)-1, bone formation factor-1 (BMP)-1, growth factor-1, vascular endothelial growth factor-1, growth factor-1, vascular endothelial growth factor-1, growth factor-1, vascular endothelial growth factor, growth factor-1, vascular endothelial growth factor The combination of base material and substrate can promote the activation of substrate cells. The molecular weight of EGF-1 is 5000. The molecular weight of IGF-1 is low. The short EGFs IGF-1 activity plays an important role in the field of interest, the end of the terminal, the DOPA, the interactive configuration of the EGFs, the input. The combination of organic materials, metal materials and special metal materials is shown under the condition of high performance. The growth of EGFs and IGF-1 cells can be enhanced by the combination of surface and high temperature cell growth. The next time you VEGF the BMP, enter the line. It is difficult for the synthesis of high molecular weight and full-length molecular weight. The enzyme method was used in the enzyme method, and the enzyme method was used in the orthogonal method. As soon as you get started, you can use the method to configure the sub-groups of new computers interactively. After that, you can make sure that DOPA is entered into the database. In this paper, we use the method, the method and the method. In the case of high temperature, high temperature, The other, the DOPA, and the other are coincident with each other. 3, 4-the importance of the base is known.

项目成果

瀋陽薬科大学(中国)

沉阳药科大学（中国）

A dual functional peptide carrying in vitro selected catalytic and binding activities

具有体外选择性催化和结合活性的双功能肽

• DOI: 10.1039/c5ob01271f
• 发表时间: 2015
• 期刊: Org. Biomol. Chem.
• 作者: Liping Zhu;Wei Wang;Haixu Zhao;Muye Xu;Seiichi Tada;Takanori Uzawa;Mingzhe Liu;and Yoshihiro Ito
• 通讯作者: and Yoshihiro Ito