B型肝炎ウイルスX遺伝子によるヒトEF-1αmRNAの転写後調節機構

乙型肝炎病毒X基因对人EF-1α mRNA的转录后调控机制

• 批准号: 11877054
• 负责人: 嶋津 務
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877054/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; X遺伝子; EF-1α; 転写後調節; EF-1αmRNA; GAPDH; B型肝炎ウィルス

1.B型肝炎ウイルス(HBV)X遺伝子を発現する組み換えアデノウイルスの作製HBV X遺伝子の上流にP1ファージのCreリコンビナーゼによって認識されるloxP配列と、それに挟まれたスタッファー配列を持つ組み換えアデノウイルスを293細胞に感染させ、高力価の非感染型標的ウイルスを大量に精製した。同様にして、Creリコンビナーゼを発現する制御ウイルスを大量に精製した。次に、両ウイルスをHepG2細胞に共感染させ、Creリコンビナーゼによるスタッファー配列の切り出しが起こり、X蛋白質が発現することを、X蛋白質に対する抗体を用いたWestern blot法および細胞の免疫染色法で解析した。その結果、X遺伝子発現アデノウイルスの単独感染ではX蛋白質の発現は認められないが、Creリコンビナーゼ発現アデノウイルスとの共感染によって、X蛋白質の発現が認められた。加えて、X蛋白質の細胞内局在は細胞質とミトコンドリアであることがわかった。従って、本研究で確立した組み換えアデノウイルスCre/loxPシステムは、X蛋白質の発現を制御できる優れたシステムとして、in vivoにおいてX蛋白質によるヒトEF-1αmRNAの転写後調節機構を解明するために有用である。2.内在性ヒトEF-1αmRNAレベルの解析X遺伝子発現アデノウイルスを単独に、またはCreリコンビナーゼ発現アデノウイルスを共に感染させたHepG2細胞からRNAを抽出し、Northern blot法にて内在のEF-1αmRNAレベルを比較した。その結果、X蛋白質が発現している細胞でEF-1αmRNAレベルの低下が認められた。3.GAPDHのEF-1αmRNA22塩基への結合活性の解析X遺伝子発現アデノウイルスを単独に、またはCreリコンビナーゼ発現アデノウイルスを共に感染させたHepG2細胞から抽出した細胞質抽出液と、in vitroで合成したEF-1αmRNA22塩基に相当するRNAプローブを用いてゲルシフトアッセイを行なった。その結果、X蛋白質の発現によってGAPDHのEF-1αmRNA22塩基への結合活性の減弱が認められた。

1. Hepatitis B virus (HBV)X gene development group, conversion group, production group In the same way, Cre The co-infection of HepG2 cells with Cre-1, Cre-2, Cre-2, Cre-3, Cre-4, Cre-4, Cre-4, As a result, X protein was found to have lost its ability to be independently infected, and X protein was found to have lost its ability to be co-infected. Add, X protein and intracellular bureau in the cytoplasm This study established that the expression of Cre/loxP protein in vivo was regulated by EF-1αmRNA. 2. Intrinsic EF-1αmRNA expression was analyzed by X-ray analysis and compared with the expression of EF-1αmRNA in HepG2 cells by Northern blot. As a result, the expression of X protein in the cells decreased with EF-1αmRNA. 3. Analysis of binding activity of EF-1α mRNA 22-mer by X-ray gene expression in HepG2 cells isolated and co-infected with Cre-Cre As a result, the expression of X protein and the decrease of binding activity of EF-1αmRNA22 subunit of GAPDH were identified.

项目成果

Tsutomu Shimazu: "Post-transcriptional control of the level of mRNA by hepatitis B virus X gene in the transient expression system using human hepatic cells"Genes to Cells. 3. 477-484 (1998)

Tsutomu Shimazu：“使用人肝细胞的瞬时表达系统中乙型肝炎病毒 X 基因对 mRNA 水平的转录后控制”Genes to Cells。