自己免疫抑制ペプチドの系統的検索
系统性寻找自身免疫抑制肽
基本信息
- 批准号:11877082
- 负责人:
- 金额:$ 1.54万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:1999
- 资助国家:日本
- 起止时间:1999 至 2000
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
BCGペプチドを認識するヒトT細胞クローンとして樹立したクローンのうち3つは、HLADRB1405拘束性にコネキシンという自己抗原由来のペプチドも認識するαβT細胞であった。このクローンを自己免疫疾患を抑制するペプチドの探索のモデルとして用いるために、3つのT細胞クローンから、それぞれTCRA、BcDNA遺伝子を単離した。それぞれのクローンは全く異なったTCRB遺伝子、TCRA遺伝子を使用し、V遺伝子ファミリーも異なっていた。これらの遺伝子を用いて、リンカーペプチドを介して直列につながる遺伝子を構築した。この遺伝子の末端には、c-mycのタグを付加した。この遺伝子をもつベクターをバキュロウイルスに組み込んで、Sf9細胞で発現させて培養上清に組換えTCR蛋白を得て、発現蛋白を、抗c-myc抗体カラムで精製したところ、SDS-PAGEで一本のバンドに泳動される蛋白を得た。さらに、T細胞クローンが認識するHLADR分子をもつB細胞株から、HLADRA(α)鎖、HLADRB(β)鎖cDNAを単離して、リンカーペプチドを介して直列につながる遺伝子を構築した。この遺伝子の末端には、ヒスチジンのタグを付加して、同様にバキュロウイルスに組み込んで、昆虫細胞で発現させて培養上清に組換えTCR蛋白を得た。産生された蛋白を、ニッケルカラムで精製したところ、やはりSDS-PAGEで一本のバンドに泳動される蛋白を得た。精製したHLA分子と合成抗原ペプチドを混合し、リコンビナントMHC/抗原ペプチド複合物を得ることができる。これらのリコンビナント蛋白の結合性をBIACOREシステムで解析したところ単一TCRリガンドと異なるTCRでは、異なった結合キネティクスがあることが明らかにあんったが、3種のクローンの生物学的反応の差異を必ずしも反映するものではなかった。他の因子が絡んでいるものと考えられる。
BCG T-cell recognition, HLADRB1405 binding T-cell recognition, αβ T-cell recognition This is the first time that we've been able to find out whether or not we've been able to control our immune system, whether or not we've been able to detect TCRA or BcDNA. All kinds of TCRB and TCRA genes are used in different ways. This is the first time that a person has ever been involved in a relationship with another person. The end of the letter, c-myc, was added. The protein was purified by SDS-PAGE and purified by TCR protein, anti-c-myc antibody and SDS-PAGE. In addition, T cell recognition of HLADR molecules in B cell lines, HLADRA(α)-lock, HLADRB(β)-lock cDNA isolation, selection, and in-line gene construction. In addition, the TCR protein was produced in the supernatant of insect cells. The protein was produced by SDS-PAGE and purified. The purification of HLA molecules and synthesis of MHC/antigen complexes BIACORE STATION ANALYSIS OF THE BINDING PROPERTY OF THE THREE KINDS OF PROTEIN: TCR STATION ANALYSIS, TCR STST The other factors are connected to each other.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kohsaka, H: "Gene therapy for arthritis"Modern Rheumatol. 10(2). 78-82 (2000)
Kohsaka,H:“关节炎的基因疗法”现代风湿病。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
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- 影响因子:0
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
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- DOI:
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- 影响因子:6
- 作者:
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田形 勇輔
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- 发表时间:
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