蛍光マウスと定量的PCR法を用いたミクロキメリズム解析

使用荧光小鼠和定量PCR方法进行微嵌合分析

• 批准号: 11877203
• 负责人: 木村 廣光
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877203/
• 关键词: 緑色蛍光蛋白; トランスジェニックマウス; ミクロキメリズム; 移植免疫寛容; 皮膚; キラーT細胞; 蛍光マウス; 定量的PCR法; PRISM7700

移植臓器の生着のメカニズムを解析し,その臨床応用,特に,臓器生着の成否を判定する診断基準として移植免疫寛容とミクロキメリズムの関連は極めて,重要な問題として提起され今日に至っている。これまでもっぱらPCR法を中心とした,遺伝子情報のみに依存してきた解析に加え,本研究で使用した緑色蛍光蛋白トランスジェニックマウスの移植への応用,特に,臓器移植後の,ミクロキメラ細胞の細胞動態を直接顕微鏡下でトレース出来る可能性は,ミクロキメリズムと移植免疫寛容のメカニズムの大いに貢献できるものと考えられる。本研究では,主に緑色蛍光蛋白トランスジェニックマウスをドナーとして,非蛍光マウスへの皮膚移植を行い。移植皮膚片の解析を行った。結果,緑色蛍光マウス蛋白は,明らかな抗原性を有し,移植皮膚片をほぼ全例(66.5±1.4日)拒絶する事が判明した。また拒絶動物にはMHC拘束性の緑色蛍光蛋白特異的キラーT細胞が誘導される事が明らかとなった。ミクロキメラ細胞の解析には,これまでの雌雄の差を利用した,性決定遺伝子SRYで解析を行った如く,レポーター遺伝子そのものに,免疫応答がない事が,この種の解析には必須である。緑色蛍光蛋白をレポーターとする遺伝子解析を生体内にて解析する事,即ちin vivoに応用するためには,緑色蛍光蛋白そのものに対して,遺伝的に無反応を示すマウス或いはラットなどの小動物を新たに見いだす必要があることが判明した。

The diagnosis criteria for organ development and its clinical application, in particular, the correlation between organ development and transplantation immunity, are important questions raised today. In this study, we used green fluorescent protein to determine the role of gene expression in transplantation, especially after organ transplantation, and the possibility of cell dynamics of cells directly under microscope. In this study, the main green fluorescent protein was used for skin transplantation without fluorescent protein. Analysis of skin graft. The results showed that the antigenicity of green fluorescent protein was positive, and the rejection of transplanted skin was obvious in all cases (66.5±1.4 days). The animals rejected MHC binding and green fluorescent protein-specific T cell induction. In the analysis of cell types, the difference between male and female is utilized, and the sex-determining gene SRY is analyzed. In the analysis of cell types, the difference between male and female is utilized, and the sex-determining gene SRY is analyzed. Green light protein protein analysis in vivo, green light protein analysis in vivo, green light protein analysis in vivo

项目成果

Kimura H,Hua Y.Goto T,Kokubo T,Amemiya H: "Microchimerism and allograft acceptance : is it caused by microchimerism or graft antigens?"Transplantation Proceedings. 32. 2045-2046 (2000)

Kimura H，Hua Y.Goto T，Kokubo T，Amemiya H：“微嵌合现象和同种异体移植接受：是由微嵌合现象还是移植抗原引起的？”移植论文集。

Lei G,Amemiya H,Suzuki S,Miyamoto M,Kimura H: "New immunosuppressive reagent, FTY720, spares immunologic memory"Transplantation Proceedings. 32. 1628-1628 (2000)

Lei G、Amemiya H、Suzuki S、Miyamoto M、Kimura H：“新型免疫抑制试剂，FTY720，保留免疫记忆”移植论文集。

Yano Y,Hara M,Shibata K,Kimura H: "Microchimeric cells from the peripheral blood associated with cardiac grafts are bone marrow derived, long-lived and maintain acquired tolerance to minor histocompatibility antigen H-Y"Transplantation. (in press).

Yano Y、Hara M、Shibata K、Kimura H：“来自与心脏移植相关的外周血的微嵌合细胞是骨髓来源的，寿命长，并保持对次要组织相容性抗原 H-Y 的获得性耐受”移植。

Adachi K,Tamura A,Sugioka A,Morita M,Kimura H: "Evidence of regulatory T lymphocytes that constitute peripheral blood microchimerism following rat liver transplantation"Transplantation Proceedings. 32. 2297-2299 (2000)

Adachi K、Tamura A、Sugioka A、Morita M、Kimura H：“大鼠肝移植后构成外周血微嵌合体的调节性 T 淋巴细胞的证据”移植论文集。

Yutaka Yata et al: "An improved method for the purification of stellate cells from rat liver with dichlormethylene dipshosphate (CL2MDP)"Methods in Cell Science. 21. 19 (1999)

Yutaka Yata 等人：“一种用二磷酸二氯甲烷 (CL2MDP) 从大鼠肝脏中纯化星状细胞的改进方法”细胞科学方法。