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神経変性因子が関わる細胞内分子ネットワーク機構の解明

阐明神经退行性因子相关的细胞内分子网络机制

基本信息

批准号：
00J08032
负责人：
富田進
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Hokkaido University (2001-2002)The University of Tokyo (2000)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J08032/
关键词：
APP X11L タンパク質相互作用 β-アミロイドアルツハイマー病 PDZ PI 老人斑

项目摘要

APPはアルツハイマー病(AD)患者の脳に検出される老人斑の主成分β-アミロイド(Aβ)の前駆体タンパク質であり、細胞内におけるAβの産生・細胞外への分泌と凝集・蓄積がADの発症に係わっていると考えられている。APPは一回膜貫通型受容体様の構造をもつ膜タンパク質であり、細胞質ドメインがAPPの代謝や生理機能の調節に重要な役割を果たしている。私は、APPの細胞質ドメインの機能に結合するタンパク質としてX11Lタンパク質を単離してきた。X11LはAPPと結合することによりAPPの代謝を安定化する事を見出していたが、昨年度X11Lの機能調節に関わる分子としてXB31タンパク質の単離を報告した。細胞に過剰発現した系では、APPはX11Lを介してXB31と三量体を形成する事を昨年報告した。しかしながら、脳内で本当に三量体を形成しているかどうかは未解明であった。そこで、今年度は脳をヨードオキサノールショ糖密度勾配法により分画し、APP, X11L, XB31を分画したのち、3つのタンパク質が共存する膜分画から共役免疫沈降法を用いて、三量体を形成していることを確認した。XB31遺伝子に関して、さらに詳細に検討した結果、XB31はスプライシングの違いによるアイソフオームが存在し、また異なる2つの遺伝子から類似のタンパク質が生成されることを見出した。そこで、これらのタンパク質をAlcadeinα1,α2,Alcadeinβ,、Alcadeinγと名付けて解析を継続することにした。AlcadeinとX11Lの結合様式を詳細に解析した結果、Alcadeinの細胞質ドメインの2つのアミノ酸がX11LのPI(Phosphotyrosin Interaction)ドメインに結合することを明らかにした。APPもX11LのPIドメインに結合するので、どうして競合しないのかをPIドメインに点変異を導入したX11Lを用いて解析した。その結果、同じPIドメインでもAPPとAlcadeinは認識サイトが異なることが明らかになった。成果は、現在論文として投稿中である。

The main component of APP's age spots in patients with Alzheimer's disease (AD) is β-Aβ (Aβ). The quality of the disease, the intracellular production of Aβ, the extracellular secretion, and the aggregation and accumulation of AD are all related to the disease. APP's primary membrane-penetrating receptor structure, membrane structure, and cytoplasmic structure are important for the regulation of metabolism and physiological functions of APP. Private は, APP ドメインのfunctional にるタンパク性としてX11LはAPPとcombinationすることによりAPPのmetabolismをstabilizationする事を见出していたが, Last year's X11L functional adjustment and control molecule and XB31 high-definition quality report was released. The cell system has been developed and the APP has been introduced, and the XB31 and XB31 three-dimensional bodies have been formed and reported last year.しかしながら、脳内で本道に三级体を Formation しているかどうかは无码であった.そこで、This year's は脳をヨードオキサノールショsugar density blending method により分色し、APP, X11L, XB31 したのち, 3つのタンパク物 coexistence する film separation から co-immunosedimentation method いて, three-dimensional body を formation していることをconfirmation した. XB31 缝子に关して、さらに综合に検问したRESULT、ソフオームがexistentし、またdifferentなる2つの伝子からsimilar to のタンパク性がGenerationされることを见出した.そこで、これらのタンパク性をAlcadeinα1,α2,Alcadeinβ,、Alcadeinγとnamefuけてanalyticsを継続することにした. Detailed analysis of Alcadein's binding formula and results, Alcadein's cytoplasmic acid PI Interaction)ドメインに合することを明らかにした. APPもいのかをPIドメインにPoint変differentをImportしたX11LをUseいてanalyticsした.そのRESULTS、 Same as じPIドメインでもAPPとAlcadeinは Meet サイトがdifferent なることが明らかになった. The result is the result, and the paper is currently being submitted.