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カルシウム感受性のあるミオシン分子のモータードメインの機能的発現の試み

カルシウム感受性のあるミオシン分子のモータードメインの機能的発現の試み
尝试功能性表达钙敏感肌球蛋白分子的运动结构域
批准号：
12030205
负责人：
小浜 一弘
金额：
$1.15万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2000 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12030205/
关键词：
ミオシンカルシウム結合性フィザルムモーター・ドメイン制御ドメイン発現蛋白質カルシウム抑制

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项目成果

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粘菌フィザルム:ミオシンは通常型(ミオシンII)のもので、Ca^<2+>を結合する性質を有する。ミオシンのモーター活性そのものにはCa^<2+>を要求しないが、Ca^<2+>を結合すると可逆的に活性が阻害される。この様なカルシウム抑制を受けるミオシンは植物など原形質流動を行う細胞に広く存在する可能性が高く、その構造と機能に興味がもたれる。これらを明らかにする為には、機能を失わずにモーター・ドメインを発現する必要があり、本特定研究の12年度を含む全期間を通じ努力して来た。初期は同じ下等有核生物という理由で、メチロトローフ酵母の発現系を利用すべく、試みてきたがどうしても成功しなかった。本年度になり、バキュロウイルス・Sf-9発現系を試みてやっと発現化に成功した。モータードメイン(制御ドメインを含む)を構成する重鎖をSf-9細胞にバキュロウイルスをベクターとして導入すると、大量に蛋白質が発現された。しかし、これは不溶性であった。軽鎖cDNAを同時に導入してはじめて可溶性蛋白質として回収できた。この発現蛋白質をベクターよりもち込むHis-tagを利用し精製したところ、basal ATPass活性があり、アクチンより活性化された。従って機能的発現に成功したといえる。Ca^<2+>の作用をみたが、ATPase活性に20%程度の阻害がみられたが、この程度では不十分で、もっと長い重鎖を発現蛋白質として得る必要があると考えられた。
期刊论文(7)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
H.Kawamichi et al.: "Calcium inhibition of cytoplasmic streaming"R.Pochet et al (eds) Kluwer. 221-244 (2000)
H.Kawamichi 等人：“细胞质流动的钙抑制”R.Pochet 等人（编）Kluwer。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
H.kishi et al.: "Inhivitory effects of ML-9, wortmannin, and Y-27632 on the chemotaxis of vascular Smooth muscle cells in response to platelet-derived growth factor-BB."J.Biochem.. 128. 719-722 (2000)
H.kishi 等人：“ML-9、渥曼青霉素和 Y-27632 对血管平滑肌细胞响应血小板衍生生长因子 -BB 的趋化性的抑制作用。”J.Biochem.. 128. 719-
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
M.Morimatsu et al.: "The molecular structure of the fastest myosin from green algae, chara."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 270. 147-152 (2000)
M.Morimatsu 等人：“来自绿藻 Chara 的最快肌球蛋白的分子结构。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 270. 147-152 (2000)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
K.Onozawa et al.: "Tissue distribution of capsaicin receptor in the various organs of rats."Proc.Japan Acad.. 76・B. 68-72 (2000)
K. Onozawa 等：“大鼠各器官中的辣椒素受体的组织分布”，日本学术期刊 76・B。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 7 条
    カルシウム感受性ミオシンをバイオチップとして利用する試み
    • 批准号：
      19659059
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.05万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    神経細胞膜の裏打ちをするアクトミオシン系蛋白質は受容体機能の制御因子たり得るか?
    • 批准号：
      13878160
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $1.22万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    カルシウム感受性のあるミオシン分子のモ-タ-・ドメインの機能的発現の試み
    • 批准号：
      11156204
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
    • 资助金额：
      $1.09万
    • 财政年份：
      1999
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    平滑筋ミオシン軽鎖キナーゼのアクチン結合性:その生理的役割の検討
    • 批准号：
      97F00427
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $1.54万
    • 财政年份：
      1998
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    海外基金