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ミオシン軽鎖キナーゼに新しく見つけられたアクチン連関の平滑筋収縮制御機能

ミオシン軽鎖キナーゼに新しく見つけられたアクチン連関の平滑筋収縮制御機能
新发现肌动蛋白相关平滑肌收缩控制功能的肌球蛋白轻链激酶
批准号：
05256206
负责人：
小浜 一弘
金额：
$1.66万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1993 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05256206/
关键词：
平滑筋ミオシン軽鎖キナーゼアクチン収縮制御カルデスモンCa^<2+>

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
昨年度の本報告書にはミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)がアクチンと結合することによりアクチン・ミオシン相互作用を阻害することを記した。この作用はMLCKのもつキナーゼ作用とは独立したものであって、Ca^<2+>存在下のカルモジュリン(Ca-CaM)により除去された。本年度はこのアクチン連関の阻害作用が(1)生理的に機能しうるかどうか?(2)MLCK分子のどの部位に存在するか?につき検討を加えることとした。(1)ニワトリ砂のう平滑筋よりミオシン、MLCK及びカルデスモン(CaD)を得た。昨年と同様に予めリン酸化したミオシンを用いてコートしたガラス板を用いるin vitro motility assayを行った。これによりアクチン線維の運動速度を測定するのであるが、運動が停止するのに必要なMLCKとCaDの濃度はそれぞれ1.0nMと60nMであった。一方、砂のう平滑筋ホモジェネートを30mM KClでよく洗い可溶性分画を除去し筋原線維を得た。これをSDS-PAGEにかけMLCKとCaDの比率を比較すると1:4.6〜1:8であった。(2)ニワトリ砂のう平滑筋のMLCKではN末端断片がアクチン結合能をもつことが報告されているが、我々も別な方法:CNBr処理によりこれを得た。この断片はN末の2-213残基より残り、アクチン線維と結合性を示した。この結合はCa-CaMにより阻害された。(1)で述べたin vitro motility assayでも、この断片が運動阻害を起こし、これはCa-CaMにより回復した。
英文摘要
昨年度の本報告書にはミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)がアクチンと結合することによりアクチン・ミオシン相互作用を阻害することを記した。この作用はMLCKのもつキナーゼ作用とは独立したものであって、Ca^<2+>存在下のカルモジュリン(Ca-CaM)により除去された。本年度はこのアクチン連関の阻害作用が(1)生理的に機能しうるかどうか?(2)MLCK分子のどの部位に存在するか?につき検討を加えることとした。(1)ニワトリ砂のう平滑筋よりミオシン、MLCK及びカルデスモン(CaD)を得た。昨年と同様に予めリン酸化したミオシンを用いてコートしたガラス板を用いるin vitro motility assayを行った。これによりアクチン線維の運動速度を測定するのであるが、運動が停止するのに必要なMLCKとCaDの濃度はそれぞれ1.0nMと60nMであった。一方、砂のう平滑筋ホモジェネートを30mM KClでよく洗い可溶性分画を除去し筋原線維を得た。これをSDS-PAGEにかけMLCKとCaDの比率を比較すると1:4.6〜1:8であった。(2)ニワトリ砂のう平滑筋のMLCKではN末端断片がアクチン結合能をもつことが報告されているが、我々も別な方法:CNBr処理によりこれを得た。この断片はN末の2-213残基より残り、アクチン線維と結合性を示した。この結合はCa-CaMにより阻害された。(1)で述べたin vitro motility assayでも、この断片が運動阻害を起こし、これはCa-CaMにより回復した。
期刊论文(8)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kazuhiro Kohama & Kooichi Saida: "Smooth muscle contraction,-new regulatory modes-" Japan Sci.Soc.Press., 200 (1994)
小滨一宏
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Ueno,T.,et al.: "Partial characterization of a rabbit liver Ca^<2+>-calmodulin-dependent kinase with myosin light chain phosphorylating activity" Biochem.Molec.Biol.Int.29. 1145-1152 (1993)
Ueno，T.等人：“具有肌球蛋白轻链磷酸化活性的兔肝Ca^2-钙调蛋白依赖性激酶的部分特征”Biochem.Molec.Biol.Int.29。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Lin,Y.,et al.: "Role of myosin in the stimulatory effect of caldesmon on the interaction between actin,myosin,and ATP" J.Biochem.114. 279-283 (1993)
Lin,Y.,et al.：“肌球蛋白在 Caldesmon 对肌动蛋白、肌球蛋白和 ATP 之间相互作用的刺激作用中的作用”J.Biochem.114。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Watanabe,Y.,et al.: "Calvasculin,as a factor affecting the microfilament assemblies in rat fibrablasts transfected by src gane" FEBS Lett.324. 51-55 (1993)
Watanabe,Y.,et al.：“Calvasculin，作为影响 src gane 转染的大鼠成纤维细胞中微丝组装的因素”FEBS Lett.324。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    カルシウム感受性ミオシンをバイオチップとして利用する試み
    • 批准号：
      19659059
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.05万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    神経細胞膜の裏打ちをするアクトミオシン系蛋白質は受容体機能の制御因子たり得るか?
    • 批准号：
      13878160
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $1.22万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    カルシウム感受性のあるミオシン分子のモータードメインの機能的発現の試み
    • 批准号：
      12030205
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
    • 资助金额：
      $1.15万
    • 财政年份：
      2000
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    カルシウム感受性のあるミオシン分子のモ-タ-・ドメインの機能的発現の試み
    • 批准号：
      11156204
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
    • 资助金额：
      $1.09万
    • 财政年份：
      1999
    • 负责人：
      小浜 一弘
    • 依托单位：
      Gunma University
    海外基金