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ミオシン軽鎖キナーゼに新しく見つけられたアクチン連関の平滑筋収縮制御機能

新发现肌动蛋白相关平滑肌收缩控制功能的肌球蛋白轻链激酶

基本信息

批准号：
05256206
负责人：
小浜一弘
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の本報告書にはミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)がアクチンと結合することによりアクチン・ミオシン相互作用を阻害することを記した。この作用はMLCKのもつキナーゼ作用とは独立したものであって、Ca^<2+>存在下のカルモジュリン(Ca-CaM)により除去された。本年度はこのアクチン連関の阻害作用が(1)生理的に機能しうるかどうか?(2)MLCK分子のどの部位に存在するか?につき検討を加えることとした。(1)ニワトリ砂のう平滑筋よりミオシン、MLCK及びカルデスモン(CaD)を得た。昨年と同様に予めリン酸化したミオシンを用いてコートしたガラス板を用いるin vitro motility assayを行った。これによりアクチン線維の運動速度を測定するのであるが、運動が停止するのに必要なMLCKとCaDの濃度はそれぞれ1.0nMと60nMであった。一方、砂のう平滑筋ホモジェネートを30mM KClでよく洗い可溶性分画を除去し筋原線維を得た。これをSDS-PAGEにかけMLCKとCaDの比率を比較すると1:4.6〜1:8であった。(2)ニワトリ砂のう平滑筋のMLCKではN末端断片がアクチン結合能をもつことが報告されているが、我々も別な方法:CNBr処理によりこれを得た。この断片はN末の2-213残基より残り、アクチン線維と結合性を示した。この結合はCa-CaMにより阻害された。(1)で述べたin vitro motility assayでも、この断片が運動阻害を起こし、これはCa-CaMにより回復した。

This report describes how the MLCK can be used to prevent interactions. This action is not only independent of MLCK, but also independent of Ca-CaM in the presence of Ca2 +. This year, the resistance effect of the relationship between the two countries is (1) physiological function. (2)MLCK molecule exists in the upper part of the molecule.につき検讨を加えることとした。(1)The following are the results of MLCK and CaD: In the same way, we're going to use the vitro motility assay. The concentration of MLCK and CaD necessary for the determination of the velocity of movement of the line was 1.0 nM to 60nM. A solution of 30mM KCl was used to remove the original trace. The ratio of MLCK to CaD is 1:4.6 ~ 1:8. (2)N-terminal fragment of MLCK can be separated by CNBr treatment. Residues 2-213 at the end of the fragment N are shown to be bound to each other. The combination of Ca-CaM and Ca-CaM is not effective. (1)In the vitro motility assay, there is no movement resistance, and there is no recovery.