微技术方法分析单个游离平滑肌细胞中肌球蛋白的功能-猫眼课题宝

微技术方法分析单个游离平滑肌细胞中肌球蛋白的功能

批准号：

03557010

负责人：

小浜一弘

金额：

$8.26万

依托单位：

Gunma University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)

财政年份：

1991

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1991 至 1992

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03557010/

关键词：

平滑筋アクトミオシンミオシンリン酸化単一細胞アクチン

项目摘要

项目成果

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英文摘要

近年になり平滑筋の薬物反応を細胞レベルで観察する研究が進み、細胞間に不均一性のある事が明らかになってきた。薬物反応の重要な指標である収縮もこの例外ではなく、収縮を担っているアクトミオシン系についても遊離された、しかも単一細胞について検討する必要性が生じている。然るにアクトミオシン系の研究では微量化・高感度化の試みが著しく遅れているのが現況であり、本研究が開始された。本研究では、すでに確立している薬物反応性のある遊離平滑筋細胞作成法を利用することよりスタートする。研究代表者らはアクチン・ミオシンの相互作用およびミオシン・リン酸化検出法につき微量化・高感度化の図れそうな次のテクニックに注目した。これらは1)収縮中の平滑筋組識を急速凍結し、リン酸化状態を変化させないまま粗製アクトミオシンを抽出する方法、2)ピロリン酸を電極液とする末変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により粗製アクトミオシン中のミオシンのリン酸化レベルを検出する方法、3)アクチン・ミオシン間のすべり運動を微量で顕微鏡下で検出するIn Vitro Motility Assay 法である。1)に関しては、ドライアイス・アセトンで急速に冷却・固定し、液体N_2下で破壊し、ピロリン酸下で抽出すること;2)に関しては、内径0.1mmのキャピラリ下で泳動を行い微量化を図ること;3)に関しては、フォスファターゼ阻害薬とキナーゼ阻害薬の利用が有効であることが判明した。

期刊论文(4)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

Kazuhiro Kohama,Ryoki Ishikawa,and Tsuyoshi Okagaki: "Calcium Inhibition of physarum Actomyosin System:Myoshi-linked and Actin-linked Natures.In Calcium Knhibition p.p.91〓〓07." Japan Sci.Soc.Press,and CRC Press.K.Kohama,ed., 16 (1992)

Kazuhiro Kohama、Ryoki Ishikawa 和 Tsuyoshi Okagaki：“绒毛菌肌动球蛋白系统的钙抑制：Myoshi 相关和肌动蛋白相关性质。钙抑制第 91 页〓〓07。日本 Sci.Soc.Press 和 CRC Press.K。”小滨编辑，16 (1992)

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Kohama,K.,Hiranuma,T.,Takano-Ohmuro,H.,Ozaki,H.,Karaki,H.and Hachisu,M.: "Effects of NAO344、a new smooth muscle relaxant,on the actin-myosin-ATP interaction and myosin light chain phosphorylation in vitro." General Pharmacology. 22. 465-474 (1991)

Kohama, K.、Hiranuma, T.、Takano-Ohmuro, H.、Ozaki, H.、Karaki, H. 和 Hachisu, M.：“NAO344（一种新型平滑肌松弛剂）对肌动蛋白-肌球蛋白-ATP 的影响体外相互作用和肌球蛋白轻链磷酸化。”普通药理学。22. 465-474 (1991)

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Kohama,K.,Okagaki,T.,Hayakawa,K.,Lin,Y,Ishikawa,R.,Shimmen,T.and Inoue,A.: "A novel regulatory effect of myosin light chain kinase from smooth muscle on the ATP-dependent interaction between actin and myosin." Biochem.Biophys.Res.Commun.184. 1204-1221 (19

Kohama,K.、Okagaki,T.、Hayakawa,K.、Lin,Y、Ishikawa,R.、Shimmen,T. 和 Inoue,A.：“平滑肌肌球蛋白轻链激酶对 ATP 的新型调节作用

DOI： --

发表时间：

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