海馬及い運動ニューロン生存を担う新規神経栄養因子の探索とその機能解析

寻找与海马和运动神经元存活相关的新型神经营养因子及其功能分析

• 批准号: 12031213
• 负责人: 船越 洋
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12031213/
• 关键词: HGF; c-Met; 神経栄養因子; 筋萎縮性側索硬化症(ALS); 運動ニューロン; HLP; スカベンジャー受容体; SRCL

(1)新規神経栄養因子としてのHGFの機能解析(1)初代培養神経細胞を用いた各種神経栄養活性の解析を行った。特に血清除去の条件に加え、グルタミン酸誘導性の神経細胞死や細胞移動、増殖活性の有無について解析を加えた。(2)神経特異的HGF発現トランスジェニックマウス(HGF-Tg)を作成した。(3)運動ニューロン疾患である筋萎縮性側索硬化症(ALS)の進行過程におけるHGF,およびc-Metの発現調節を、SOD1G93A変異をもつALSモデルトランスジェニックマウス(ALS-Tg)を用いて詳細に解析した。(4)新規神経栄養因子としてのHGFのALSにおける機能を、HGF-TgとALS-Tgのダブルトランスジェニックマウスを作成し、解析した。その結果HGF遺伝子をALS-Tgの神経細胞へ直接長期発現することでALS-Tgの病態進行を遅延させ延命効果を発揮することが明らかとなった。(2)HGFファミリー分子(HLP)の新規神経栄養因子としての同定と発現解析(1)HLPは微量の他の神経栄養因子共存下で鶏胚の末梢神経節の神経突起伸長と細胞移動を促進した。この作用はHLPの受容体Ronの細胞外ドメインとIgG-Fcとの融合蛋白(Ron-Fc)で阻害されたことから、HLPと微量の他の神経栄養因子による神経栄養活性はRon/HLP受容体シグナルに依存することが明らかとなった。(2)マウス末梢神経節におけるHGF,HLP,c-Met,Ronの発生過程における発現解析を行った。(3)新規スカベンジャー受容体Scavenger Receptor with C-type Lectin(SRCL)のクローニングと機能解析Yeast two-hybrid法で得られた部分断片をもとに、新規スカベンジャー受容体SRCLをクローニングした。SRCLは2型の膜蛋白質で、SR-A等のスカベンジャー受容体に見られるcollagen-likeドメインに加え,C-type Lectinドメインをもつことを特徴とする。CHO-K1細胞にSRCLを発現させると、細菌(E.ColiやS.aureus)への結合能を獲得した。脳や培養ミクログリアにも発現を認めることから神経系における機能が示唆された。

（1）对HGF作为一种新型神经营养因子的功能分析（1）使用原代培养神经元分析了各种神经营养活性。除了清除血清的条件外，还对谷氨酸诱导的神经元细胞死亡，细胞迁移和增殖活性进行了分析。 （2）制备表达神经特异性HGF（HGF-TG）的转基因小鼠。 （3）使用携带SOD1G93A突变的ALS模型转基因小鼠（ALS-TG）对肌萎缩性侧索硬化症（ALS）进展过程中HGF和C-MET的表达进行了详细分析。 （4）通过创建HGF-TG和ALS-TG的双转基因小鼠，分析了HGF作为一种新型神经营养因子的新型神经营养因子的功能。结果，据揭示了HGF基因在ALS-TG的神经元中直接以长期的长期表达，这延迟了ALS-TG病理的发展并发挥了生命的效果。 （2）HGF家族分子（HLP）作为新的神经营养因子（1）HLP在存在痕量的其他神经营养因子的情况下，HGF家族分子（HLP）作为新的神经营养因子（HLP）促进了鸡肉胚胎的周围神经节中的神经突生长和细胞迁移。 HLP受体RON和IgG-FC之间的融合蛋白（RON-FC）抑制了这种作用，这表明HLP神经营养活性和其他神经营养因子的痕量取决于RON/HLP受体信号。 （2）在小鼠的外围神经节中HGF，HLP，C-MET和RON的发育过程中进行了表达分析。 （3）基于通过酵母双杂化方法获得的部分片段，对新型的清道夫受体清道夫受体进行克隆和功能分析，克隆了新型的清道夫受体SRCL。 SRCL是一种2型膜蛋白，其特征是除了在SR-A等清道夫受体中发现的胶原蛋白样域外具有C型凝集素结构域。 SRCL在CHO-K1细胞中的表达达到了与细菌结合的能力（大肠杆菌和金黄色葡萄球菌）。在大脑和培养的小胶质细胞中也观察到表达，这表明其在神经系统中的功能。

项目成果

K.Matsumoto: "Hepatocyte growth factor in renal regeneration, renal disease, and potential therapeutics."Hypertension. 9. 395-402 (2000)

K.Matsumoto：“肝细胞生长因子在肾脏再生、肾脏疾病和潜在治疗中的作用。”高血压。

S.Radaeva: "Unique epithelial cell production of hepatocyte growth factor/scatter factor by putative precancerous intestinal metaplasias and associated "intestinal-type" of biliary cancer chemically-induced in rat liver."Hepatology. 31. 1257-1265 (2000)

S.Radaeva：“通过假定的癌前肠化生和在大鼠肝脏中化学诱导的相关“肠型”胆道癌，上皮细胞产生独特的肝细胞生长因子/分散因子。”肝病学。

S.Mizuno: "Reciprocal balance of hepatocyte growth factor and transforming growth factor-β1 in renal fibrosis in mice"Kidney Intern.. 57. 937-948 (2000)

S. Mizuno：“小鼠肾纤维化中肝细胞生长因子和转化生长因子-β1 的相互平衡” Kidney Intern.. 57. 937-948 (2000)

K.Kuba: "HGF/NK4, a four-kringle fragment of hepatocyte growth factor, is an angiogenesis inhibitor that suppresses tumor growth and metastasis in mice."Cancer Res.. 60. 6737-6743 (2000)

K.Kuba：“HGF/NK4 是肝细胞生长因子的四环片段，是一种血管生成抑制剂，可抑制小鼠肿瘤生长和转移。”Cancer Res.. 60. 6737-6743 (2000)

K.Beppu: "Elevation of serum hepatocyte growth factor concentration in patients with gastric cancer is mediated by production by tumor tissue."Anticancer Res.. 20. 1263-1268 (2000)

K.Beppu：“胃癌患者血清肝细胞生长因子浓度的升高是由肿瘤组织的产生介导的。”Anticancer Res.. 20. 1263-1268 (2000)