海馬及び運動ニューロン生存を担う新規神経栄養因子の探索とその機能解析

寻找与海马和运动神经元存活相关的新型神经营养因子及其功能分析

• 批准号: 11157217
• 负责人: 船越 洋
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157217/
• 关键词: 肝細胞増殖因子; HGF; HLP; Gas6; 神経栄養因子; ニューロン; クローニング; トランスジェニックマウス

(1)海馬ニューロンに対するHGFおよび新規神経栄養因子Gas6のもつin vitro神経栄養活性の解析HGFは新規神経栄養因子であるが、これまで明かとなっていた海馬ニューロンの血清除去による神経細胞死モデルに加え、グルタミン酸誘導性神経細胞死モデルやアミロイドβ25-35誘導性神経細胞死をHGFが濃度依存性に阻止することを明らかにした。また脳神経系特異的チロシンキナーゼ型受容体SkyのリガンドGas6が新規神経栄養因子として機能し、海馬、さらには小脳顆粒細胞に対し神経生存促進活性をもつことを同定した。(2)脳神経系特異的チロシンキナーゼ型受容体Skyのファミリー分子のクローニングとその機能解析新規神経栄養因子として昨年同定したGas6の受容体Skyにはファミリー受容体Axlおよびc-Merが知られる。私達はアフリカズメガエルから第4番目のファミリー受容体をクローニングしXksyと名付けた。このリガンドはまだ不明であるためXksyの膜貫通および細胞内領域とEGFの細胞外領域とのキメラタンパクを作成した。現在この分子をEGFで活性化しXksyの機能を解析している。(3)HGFファミリー分子(HLP)の新規神経栄養因子としての同定HGF-like protein(HLP)はHGFと同様4つのクリングル構造をもつアルファ鎖とセリンプロテアーゼ様構造をもつベータ鎖よりなる。これまでHLPはマクロファージに対する機能しか知られていなかったが、本研究でHLPが鶏胚感覚神経節にin vitroで神経栄養活性(神経突起伸長・migration促進活性)を示すことを明かとした。HLPの活性の特異性は、Ron/HLPレセプターの細胞外ドメインとイムノグロブリンFcとのキメラタンパクにより確認された。(4)運動神経変性疾患モデルマウスに対する新規神経栄養因子(HGF)の機能解析(a)神経系特異的HGF発現トランスジェニックマウス(NE-HGF-Tg)の作成 生後活性化される神経特異的プロモーター制御下にHGF-tagを発現する神経特異的HGF発現マウス(NS-Tg-HGF)を作成した。(b)NS-HGF-Tgと筋萎縮性側索硬化症(ALS)モデルTg-マウスであるSOD-1変異遺伝子Tg-マウスの交配によるダブルTg-マウスの作成とHGFのALSにおける機能解析 ダブルTg-マウスではHGF遺伝子を脳血液関門を考慮せず長期間ALS-Tg-マウスの神経に直接発現できる。ダブルTg-マウスでALSの発症遅延と生存期間の解析中である。

（1）分析海马神经元中HGF和新型神经营养因子GAS6 HGF中的神经营养因子6是一种新型神经营养因子，除了先前揭示的神经元细胞死亡模型外，还通过血清清除海马神经元的血清去除海马神经元，我们还揭示了HGF抑制了gl炎的glitamy ind and to and and and and and and and and and and and。 β25-35诱导的神经元死亡以浓度依赖性方式。我们还确定了GAS6是一种颅神经系统特异性酪氨酸激酶受体天空的配体，它是一种新型的神经营养因子，并且在海马乃至小脑颗粒细胞中具有神经外生促进活性。 （2）颅神经系统特异性酪氨酸激酶受体天空的克隆和分析：家族受体AXL和C-MER被称为GAS6受体天空，去年被确定为新型神经营养因子。我们从非洲黎明青蛙克隆了第四个家庭受体，并将其命名为XKSY。该配体仍然未知，因此在XKSY的跨膜和细胞内区域与EGF的细胞外区域之间产生了嵌合蛋白。当前，该分子正在用EGF激活以分析XKSY的功能。 （3）将HGF家族分子（HLP）鉴定为一种新型的神经营养因子HGF样蛋白（HLP），由具有四个Kringle结构的α链组成，具有四个Kringle结构和具有丝氨酸蛋白酶样结构的β链，就像HGF一样。到目前为止，仅知道HLP对巨噬细胞起作用，但是在这项研究中，据显示，HLP在体外在鸡胚胎的感觉中表现出神经营养活性（神经突生长和促进迁移活性）。 HLP活性的特异性通过RON/HLP受体的细胞外域和免疫球蛋白FC的嵌合蛋白证实。 （4）在运动神经退行性疾病的小鼠模型小鼠中的新型神经营养因子（HGF）的功能分析（a）创建表达神经系统特异性HGF（NE-HGF-TG）神经特异性HGF HGF HGF HGF表达小鼠（NS-TG-HGF）表达HGF HGF-TAG的NEURESP AINTRIC COTRATION se NEATIC ATRATIC aTNATIC的启动下的转基因小鼠的功能分析。 （b）通过交配NS-HGF-TG和SOD-1突变基因TG小鼠，一种肌萎缩性侧面硬化症（ALS）模型TG-MOUSE以及ALS在双TG-Mouse中HGF的功能分析，HGF基因可以直接表达出Als-TG-MOLE的神经，以备用ALS-TG-MOLE，可以直接表达出ALS-TG基因，供ALS-TG-MOLS置于较长的时间。目前正在分析ALS的延迟发作和双TG小鼠中的生存。