海馬及び運動ニューロン生存を担う新規神経栄養因子の探索とその機能解析

寻找与海马和运动神经元存活相关的新型神经营养因子及其功能分析

• 批准号: 11157217
• 负责人: 船越 洋
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157217/
• 关键词: 肝細胞増殖因子; HGF; HLP; Gas6; 神経栄養因子; ニューロン; クローニング; トランスジェニックマウス

(1)海馬ニューロンに対するHGFおよび新規神経栄養因子Gas6のもつin vitro神経栄養活性の解析HGFは新規神経栄養因子であるが、これまで明かとなっていた海馬ニューロンの血清除去による神経細胞死モデルに加え、グルタミン酸誘導性神経細胞死モデルやアミロイドβ25-35誘導性神経細胞死をHGFが濃度依存性に阻止することを明らかにした。また脳神経系特異的チロシンキナーゼ型受容体SkyのリガンドGas6が新規神経栄養因子として機能し、海馬、さらには小脳顆粒細胞に対し神経生存促進活性をもつことを同定した。(2)脳神経系特異的チロシンキナーゼ型受容体Skyのファミリー分子のクローニングとその機能解析新規神経栄養因子として昨年同定したGas6の受容体Skyにはファミリー受容体Axlおよびc-Merが知られる。私達はアフリカズメガエルから第4番目のファミリー受容体をクローニングしXksyと名付けた。このリガンドはまだ不明であるためXksyの膜貫通および細胞内領域とEGFの細胞外領域とのキメラタンパクを作成した。現在この分子をEGFで活性化しXksyの機能を解析している。(3)HGFファミリー分子(HLP)の新規神経栄養因子としての同定HGF-like protein(HLP)はHGFと同様4つのクリングル構造をもつアルファ鎖とセリンプロテアーゼ様構造をもつベータ鎖よりなる。これまでHLPはマクロファージに対する機能しか知られていなかったが、本研究でHLPが鶏胚感覚神経節にin vitroで神経栄養活性(神経突起伸長・migration促進活性)を示すことを明かとした。HLPの活性の特異性は、Ron/HLPレセプターの細胞外ドメインとイムノグロブリンFcとのキメラタンパクにより確認された。(4)運動神経変性疾患モデルマウスに対する新規神経栄養因子(HGF)の機能解析(a)神経系特異的HGF発現トランスジェニックマウス(NE-HGF-Tg)の作成 生後活性化される神経特異的プロモーター制御下にHGF-tagを発現する神経特異的HGF発現マウス(NS-Tg-HGF)を作成した。(b)NS-HGF-Tgと筋萎縮性側索硬化症(ALS)モデルTg-マウスであるSOD-1変異遺伝子Tg-マウスの交配によるダブルTg-マウスの作成とHGFのALSにおける機能解析 ダブルTg-マウスではHGF遺伝子を脳血液関門を考慮せず長期間ALS-Tg-マウスの神経に直接発現できる。ダブルTg-マウスでALSの発症遅延と生存期間の解析中である。

(1) The hippocampus ニュ ニュ ロ に に に に is responsible for するHGFおよび new regulation and 栄 nutritional factor Gas6 <s:1> ロ in Vitro god 経 tech students.their ownship keep active の parsing HGF は new rules god 経 tech students.their ownship raise factor で あ る が, こ れ ま で Ming か と な っ て い た hippocampal ニ ュ ー ロ ン の serum remove に よ る 経 cell death god モ デ ル に え, グ ル タ ミ god 経 ン acid induced cell death モ デ ル や ア ミ ロ イ ド beta 25-35 経 cell death induced god を HGF が concentration dependence に stop Youdaoplaceholder0 に とを Ming ら に に た. ま た 脳 god 経 system specific チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ type by the Sky let body の リ ガ ン ド Gas6 が new rules god 経 tech students.their ownship raise factor と し て function し, hippocampus, さ ら に は small 脳 granulosa cells に し seaborne god 経 survival to promote active を も つ こ と を with fixed し た. (2) god 脳 経 specific チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ type by the Sky let body の フ ァ ミ リ ー molecular の ク ロ ー ニ ン グ と そ の function analytical new rules god 経 tech students.their ownship raise factor と し て in yesterday with fixed し た Gas6 の by Sky let body に は フ ァ ミ リ ー by let body Axl お よ び c - killing が know ら れ る. Private da は ア フ リ カ ズ メ ガ エ ル か ら 4 times eye の フ ァ ミ リ ー by let body を ク ロ ー ニ ン グ し Xksy と name pay け た. Unknown こ の リ ガ ン ド は ま だ で あ る た め Xksy の transmembrane お よ び intracellular field と EGF の extracellular domain と の キ メ ラ タ ン パ ク を made し た. Now, the <s:1> <s:1> molecule をEGFで activates the <s:1> Xksy <s:1> function を analysis <s:1> て る る る. (3) the HGF フ ァ ミ リ ー molecules (HLP) の new rules god 経 tech students.their ownship raise factor と し て の set with HGF - like protein (HLP) は HGF と with others in four つ の ク リ ン グ ル tectonic を も つ ア ル フ ァ lock と セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ others in tectonic を も つ ベ ー タ lock よ り な る. こ れ ま で HLP は マ ク ロ フ ァ ー ジ に す seaborne る function し know か ら れ て い な か っ た が, this study で HLP が 鶏 embryo 覚 god 経 section に in vitro で god 経 tech students.their ownship keep active (god 経 protuberant, elongation migration, promote active) を shown す こ と を Ming か と し た. HLP の active の specificity は, Ron/HLP レ セ プ タ ー の extracellular ド メ イ ン と イ ム ノ グ ロ ブ リ ン Fc と の キ メ ラ タ ン パ ク に よ り confirm さ れ た. (4) exercise 経 god - disorder モ デ ル マ ウ ス に す seaborne る new rules god 経 tech students.their ownship raise factor (HGF) の function resolution (a) god 経 system specific HGF 発 now ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス (NE - HGF - Tg) の is made Born after activation さ れ る god 経 specific プ ロ モ ー タ ー under the system of imperial に HGF - tag を 発 now す る god 経 specific HGF 発 now マ ウ ス (NS - Tg - HGF) を made し た. (b) NS HGF - Tg と reinforcement atrophic amyotrophic lateral sclerosis (ALS) モ デ ル Tg - マ ウ ス で あ る SOD - 1 - different heritage 伝 son Tg - マ ウ ス の mating に よ る ダ ブ ル Tg - マ ウ ス の made と HGF の ALS に お け る function resolution ダ ブ ル Tg - マ ウ ス で は HGF posthumous son 伝 を 脳 blood masato door を consider せ ず ALS Tg - between long-term マ ウ ス の god 経 に 発 now directly で き る. Youdaoplaceholder0 と Tg- ウスで ウスでALS <s:1> occurrence 遅 prolonged と survival period <s:1> analysis である.

项目成果

K. Kosai, K. Matsumoto, H. Funakoshi, and T. Nakamura: "Hepatocyte growth factor prevents endotoxin-induced lethal hepatic failure in mice"Hepatology. 30. 151-159 (1999)

K. Kosai、K. Matsumoto、H. Funakoshi 和 T. Nakamura：“肝细胞生长因子可预防内毒素诱导的小鼠致命性肝衰竭”肝病学。

T.Ueki, et al.: "Hepatocyte growth factor gene therapy of liver cirrhosis in rats."Nature Medicine. 5. 226-230 (1999)

T.Ueki 等人：“大鼠肝硬化的肝细胞生长因子基因治疗。”《自然医学》。