動脈硬化に対する抗MCP-1遺伝子治療法の開発変異型MCP-1遺伝子導入による生体レベルでの病態解析と遺伝子治療法

开发针对动脉硬化的抗MCP-1基因疗法 通过引入突变型MCP-1基因进行病理分析和生物学水平的基因治疗

• 批准号: 12032216
• 负责人: 江頭 健輔
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12032216/
• 关键词: 動脈硬化; ケモカイン; 遺伝子治療

新規抗monocyte chemoattractant protein-1遺伝子治療によるバルーン傷害後血管狭窄反応の抑制【目的】バルーン血管形成術後の再狭窄は新生内膜肥厚と陰性リモデリング(血管収縮)によって生じるが、その分子機序は不明である。バルーンによる血管拡張後早期にmonocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)の発現が増し単球・マクロファージの血管壁内進入が生じることが明らがにされている。また、この炎症性変化が狭窄の成立に関与する可能性が示唆されている。しかし、この点を証明した研究はない。最近我々は変異型MCP-1遺伝子導入によってMCP-1による炎症が阻止されることを発見した。そこで本研究の目的は、この新しい方法を用いてバルーン傷害後血管狭窄反応に対するMCP-1の役割を実証することである。【方法】高コレステロール食負荷2週間投与後、ウサギ右総頚動脈を露出し同外頚動脈よりFogartycatheterを挿入しバルーン傷害モデルを作成した。手術の3日前、右大腿筋内に変異型MCP-1遺伝子(500μg+electroporation法、n=8)あるいは、PBS(PBS+electroporation法、n=7)を筋注した。手術4週間後に、頚部エコーを施行した。3日後、7日後、28日後に病理組織学的検索を行った。【結果】1.マクロファージ浸潤の抑制効果:内膜・中膜のマクロファージ比率(RAM11陽性細胞数/全細胞数)は、7ND群(28日後、25±5%、22±0.1%)で、PBS群(28日後、33±0.3%、51±0.1%)と比較して有意に少なかった。2.新生内膜抑制効果:内膜面積はPBS群0.65±0.02mm2、7ND群0.39±0.04mm2であり、と7ND群で有意に小さく内膜肥厚が抑制されていた。内膜/中膜比も7ND群で有意に小さかった(7ND群=0.2±0.2、PBS群:0.9±0.2)。3.陰性リモデリング抑制効果:エコーでの血管内径は、7ND群2.1±0.1mm、PBS群1.7±0.1mmであり、7ND群でPBS群に比し有意に広かった。【考察】変異型MCP-1遺伝子導入によるMCP-1活性の抑制により、高コレステロール血症ウサギのバルーン傷害後血管狭窄モデルの内膜肥厚ならびに陰性リモデリングは著明に抑制され、狭窄が防止された。本研究により、バルーン傷害後血管狭窄反応の病態においてMCP-1が必須の役割を果たすことが明らかとなった。この新規遺伝子治療がヒト血管形成術後再狭窄の遺伝子治療法となりうることが示唆された。

New anti-lymphocyte chemoattractant protein-1 gene therapy for the inhibition of vascular stenosis after injury [Objective] The molecular mechanism of restenosis after angioplasty is unknown. In the early stage after vasodilation in Bali, the occurrence of monocyte-chemoattractant protein-1(MCP-1) increases, which is why it is so obvious that it can enter the blood vessel wall of a single ball. The possibility of inflammation and stenosis is also discussed. This is the first time I've ever been to a university. Recently, we have been able to detect the presence of MCP-1 gene in the expression system. The aim of this study is to demonstrate the role of MCP-1 in the prevention of vascular stenosis after injury by using a novel method. [Method] After 2 weeks of high cholesterol injection, the right carotid artery was exposed and the external carotid artery was exposed. Three days before surgery, MCP-1 gene (500μg+ electrolysis method, n=8) was injected into the tendon of the right thigh, PBS(PBS+ electrolysis method, n=7) was injected into the tendon. 4 weeks after the operation, the patient was treated. After 3 days, 7 days and 28 days, the pathological examination was carried out. [Results] 1. Infiltration inhibition effect: Ratio of intima and media (RAM11 positive cells/whole cells), 7ND group (28 days, 25±5%, 22±0.1%), PBS group (28 days, 33±0.3%, 51±0.1%), and intentional decrease. 2. Neointimal inhibition effect: intimal area PBS group 0.65±0.02mm2, 7ND group 0.39±0.04mm2, 7ND group intentionally small intimal hypertrophy was inhibited. Intima/media ratio 7ND group was intentionally small (7ND group =0.2±0.2, PBS group:0.9±0.2). 3. The inhibition effect of negative emission was: the diameter of blood vessel in 7ND group was 2.1±0.1mm, that in PBS group was 1.7±0.1mm, that in 7ND group was 1.7±0.1mm. [Investigation] The inhibition of MCP-1 activity due to the introduction of different MCP-1 gene, high cholesterol, high blood pressure, and vascular stenosis after injury, and intimal hypertrophy, negative cholesterol, and low cholesterol, were observed. The present study is aimed at detecting the pathological changes in MCP-1 after injury. The new method of gene therapy for restenosis after angioplasty is proposed.

项目成果

Koyanagi M,Egashira K, et al: "Role of monocyte chemoattractant protein-1 in cardiovascular remodeling induced by chronic blockade of nitric oxide synthesis in rats."Circulation. 102. 2243-2248 (2000)

Koyanagi M、Egashira K 等人：“单核细胞趋化蛋白-1 在大鼠慢性阻断一氧化氮合成诱导的心血管重塑中的作用。”循环。

Kitamoto S,Egashira K, et al.: "Increased activity of nuclear factor kB participates to cardiovascular remodeling induced by chronic inhibition of nitric oxide synthesis in rats."Circulation. 102. 806-812 (2000)

Kitamoto S、Egashira K 等人：“核因子 kB 活性的增加参与了大鼠因长期抑制一氧化氮合成而诱导的心血管重塑。”循环。

Egashira K, et al: "Anti-monocyte chemoattractant protein-1 gene therapy inhibits vascular remodeling in rats. Blockade of MCP-1 activity following intramuscular transfer of a mutant gene inhibits vascular remodeling induced by chronic blockade of NO synt

Egashira K 等人：“抗单核细胞趋化蛋白 1 基因治疗可抑制大鼠血管重塑。肌肉内转移突变基因后阻断 MCP-1 活性可抑制长期阻断 NO 合成物诱导的血管重塑。

Ni WH,Egashira K, et al: "A New Anti-Monocyte Chemoattractant Protein-1 Gene Therapy Inhibits Atherosclerosis in ApoE-knockout Mice."Circulation. (印刷中).

Ni WH、Egashira K 等人：“一种新型抗单核细胞趋化蛋白 1 基因疗法可抑制 ApoE 敲除小鼠的动脉粥样硬化。”循环（正在出版）。