動的・準動的結晶解析法による蛋白質間相互作用の研究

利用动态和准动态晶体学研究蛋白质-蛋白质相互作用

基本信息

批准号：
12034212
负责人：
樋口芳樹
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1..DsrD(dissimilatory sulfite reductase D)タンパク質とDNA(RNA)との相互作用解明DsrDタンパク質の3.5ÅにおけるX線結晶解析の結果,その主鎖の折れたたみ構造のパターンはADAR1のZαドメインの構造と酷似していることが分かった.このZαドメインは,Z-DNAとの複合体として結晶解析されていることから,本DsrDもDNAあるいはRNAと相互作用するものと考えられた.今年度,さらに高分解能(1.5Å)の解析に成功し,側鎖も含めた全構造を解明した.その結果,核酸と相互作用すると考えられる部分の表面構造はZαドメインの構造と似ているものの,その表面電荷のパターンは異なっていることが判明した.また,高分解能の精密化により分子表面にモノマーあたり3-4個の硫酸イオンが同定された.2.ヒドロゲナーゼの水素活性化機構の解明ヒドロゲナーゼの活性阻害剤・CO分子結合型の超高分解能X線結晶解析に成功した.CO分子はNi原子に結合しており、生体分子中のNi原子とCO分子の結合状態をX線解析で示したのは本研究が最初である.また,水素活性化にNi原子のひとつのシステイン配位子が重要であることが明らかになった.3.細胞分化に関与するAxinタンパク質の構造化学AxinはWntシグナル伝達経路を負に制御していると考えられている.この分子はβ-カテニン等多くのタンパク質と結合し,シグナル伝達の足場的な役割を持つことからその精製・純品化が課題であった.本年度は,Axin中に見いだされているDIXドメインの精製法の開発に成功し,現在結晶化実験にはいっている.

1..DSRD（异化亚硫酸盐还原D）蛋白质与DSRD蛋白的DNA（RNA）X射线晶体学之间的相互作用在3.5ÅX射线晶体学下显示，主链折叠结构的折叠结构的模式与Adar1的Zα域的折叠结构非常相似。该Zα结构域与Z-DNA结晶为复合物，并且认为该DSRD也会与DNA或RNA相互作用。今年，我们成功地分析了更高的分辨率（1.5Å），并阐明了包括侧链在内的整个结构。结果，发现尽管被认为与核酸相互作用的部分的表面结构与Zα结构域相似，但表面电荷模式是不同的。此外，高分辨率的细化表明，在分子表面鉴定出每个单体3-4个硫酸盐离子2。 Hyd阐明了Rogenase的氢气激活机制，我们成功地对CO分子结合的超高分辨率X射线晶体学X射线晶体学是一种氢化酶的活性抑制剂。 CO分子与Ni原子结合，这项研究是首次通过X射线分析显示生物分子中Ni原子和CO分子的结合状态。还揭示了Ni原子的一种半胱氨酸配体对于氢气激活很重要。 3。与细胞分化有关的Axin蛋白的结构化学性质被认为对Wnt信号通路进行负调节。该分子与许多蛋白质（例如β-catenin）结合，并且在信号传导中具有脚手架作用，因此纯化和纯化是一个挑战。今年，我们成功开发了一种净化Axin中发现的DIX域的方法，目前正在进行结晶实验。