PCモチーフを含むタンパク質の特異的認識の解析

含有PC基序的蛋白质的特异性识别分析

• 批准号: 12034221
• 负责人: 寺沢 宏明
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12034221/
• 关键词: PCモチーフ; PB1ドメイン; NMR; 立体構造; Cdc24p; Bem1p; 特異的認識

PCモチーフ(Phox and Cdc24p)は、多くのシグナル伝達タンパク質に存在する、連続した酸性残基と疎水性残基が交互に現れる約20残基のアミノ酸配列で、進化的に保存されている。出芽酵母の細胞極性を調節するCdc24pや、食細胞NADPHオキシダーゼ(Phox)の細胞質内因子であるp40phoxは、PCモチーフを含む80-100残基程度の領域(PCCR:PC motif containing region)で、住本・伊藤らに見出された新規なドメインであるPB1ドメイン(Cdc24pの結合タンパク質であるBem1pと、p40phoxの結合因子であるp67phoxに存在する)と特異的に結合する。我々はBem1pPB1ドメインの立体構造をNMR法により決定し、化学シフトの変化に基いてCdc24pPCCRとの結合部位を同定した。さらに本研究では、Bem1pPB1ドメインの結合パートナーであるCdc24pPCCRについて立体構造解析を進めた。主鎖のNMR解析を終了し、2次構造を調べた結果、4ストランドのβシートと2本のαヘリックスからなることがわかった。また、それらのトポロジーも明らかになった。また、Bem1pPB1ドメインとの複合体におけるCdc24pPCCRの主鎖のNMR解析を終了し、化学シフト変化を調べた結果、Bem1pPB1ドメインとの結合部位も明らかになった。Cdc24p PCCRとBem1pPB1ドメインについて、各々の結合部位の電荷分布を調べた結果、複合体の結合の様子がモデリング可能になり、特異的な結合を担うアミノ酸残基もほぼ明らかになった。現在共同研究者と変異体による確認を行っている。

PC モ チ ー フ (Phox and Cdc24p) は, multiple く の シ グ ナ ル 伝 da タ ン パ ク qualitative に exist す る, even 続 し た acid residues と 疎 waterborne residues が interaction に れ now about 20 residues る の ア ミ ノ acid with column で, evolutionary に save さ れ て い る. の budding yeast cell polarity を regulation す る Cdc24p や, food cell NADPH オ キ シ ダ ー ゼ cytoplasm factor (Phox) の で あ る p40phox は, PC モ チ ー フ を containing む residues 80-100 degree の field (PCCR: PC motif containing Region) で, live Ben ITO ら に shows さ れ た new rules な ド メ イ ン で あ る PB1 ド メ イ ン (Cdc24p の combining タ ン パ ク qualitative で あ る Bem1p と, p40phox の combination factor で あ る p67phox に exist す る) と specific に combining す る. I 々 は Bem1pPB1 ド メ イ ン の three-dimensional structure を NMR method に よ り decided し, chemical シ フ ト の variations change に base い て Cdc24pPCCR と の combining site を with fixed し た. さ ら に this study で は, Bem1pPB1 ド メ イ ン の combining パ ー ト ナ ー で あ る Cdc24pPCCR に つ い て three-dimensional structure parsing を into め た. Master lock の NMR analytical を end し, two tectonic を べ た results, 4 ス ト ラ ン ド の beta シ ー ト と 2 this の alpha ヘ リ ッ ク ス か ら な る こ と が わ か っ た. Youdaoplaceholder0, それら それら トポロジ トポロジ ら ら ら になった. ま た, Bem1pPB1 ド メ イ ン と の complex に お け る Cdc24pPCCR の master lock の NMR analytical を end し, chemical シ フ ト variations change を adjustable べ た results, Bem1pPB1 ド メ イ ン と の combining site も Ming ら か に な っ た. Cdc24p PCCR と Bem1pPB1 ド メ イ ン に つ い て, various 々 の combining site の charge distribution を adjustable べ た results, as well as the combination of complex の の others child が モ デ リ ン グ may に な り, specific な combined を bear う ア ミ ノ acid residues も ほ ぼ Ming ら か に な っ た. Now the co-researchers と variant による confirm the を line って る る.