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卵由来物質による精子活性化・走化性現象の分子機構の解明

阐明卵源物质激活精子和趋化的分子机制

基本信息

批准号：
12045215
负责人：
吉田学
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

受精の際、精子が卵に遭遇する確率を高める仕組みのひとつとして精子活性化・走化性現象が知られている。しかし、その精子活性化・誘引物質が微量なため精製が困難であることなどから、この現象の分子機構の研究はほとんど解明されていない。本研究では卵による精子の活性化及び誘引現象の分子メカニズムの全容解明のため、まずユウレイボヤ精子活性化・誘引物質(SAAF)の分子構造の解析を行い、さらに精子走化性における分子機構についての研究を行った。まずSAAFの精製標品についてESI-TOF/MSを用いて分子量解析を行ったところ、m/z=297.132の二価陰イオンの単一ピークを得た。次に3H-NMR解析を行ったところ、この物質の構造はコレスタン骨格を持つ分子量594.256の新規の硫酸化ステロイドであることが推定された。さらにFAB/MSによる分子フラグメント解析を行ったところ、NMRによる推定構造式より予想される分子ピークパターンと良く一致する結果が得られ、また加水分解反応による脱硫酸化により精子活性化・誘引活性は消失することが明らかとなった。以上の結果より、SAAFの構造が実際にNMRによる推定構造を持つことが強く示唆された。また、SAAFによる精子走化性時の分子機構の解析を行った。精子走化性においては細胞外カルシウムが必要であることが解っている。そこでどのようなカルシウムチャネルが関与しているのかを検定した。その結果、電位依存性カルシウムチャネルの特異的阻害剤であるニフェジピン等が全く効果を持たないのに対して容量作動性カルシウムチャネルの阻害剤であるSK&F96365等が効果的に精子の走化性運動を抑制すること、実際に精子中において容量作動型カルシウム流入が見られることから、精子走化性においては容量作動性カルシウムチャネルが働いていると思われる。

During fertilization, sperm encounter with eggs is highly accurate. The study of the molecular mechanism of sperm activation and induction substances is difficult. In this study, the molecular mechanism of sperm activation and induction was studied, and the molecular structure of sperm activation and induction substance (SAAF) was analyzed. The ESI-TOF/MS analysis of SAAF's refined standard was carried out with m/z=297.132. 3H-NMR analysis was performed to determine the structure and structure of the substance. The molecular weight of the substance was 594.256 and the sulfated substance was estimated to be new. FAB/MS molecular analysis, NMR, putative structural formula, predicted molecular analysis, good agreement, results obtained, hydrolysis reaction, sperm activation, induced activity, disappearance, etc. The results above show that the structure of SAAF is closely related to the actual NMR and the presumed structure is closely related to the actual NMR. Analysis of the molecular mechanism of sperm motility in SAAF Sperm mobility is essential for the development of extracellular processes. The first step is to create a new relationship between the two countries. As a result, the potential-dependent pattern of sperm production is characterized by specific inhibitors such as SK&F96365, etc., which inhibit sperm motility, and in fact, sperm inflow is characterized by specific inhibitors such as SK&F96365, etc. Sperm mobility is a function of sperm motility.