精子走化性における誘引物質の鞭毛運動制御機構の解明

阐明精子趋化过程中引诱剂鞭毛运动控制机制

基本信息

批准号：
16687003
负责人：
吉田学
金额：
$ 19.39万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

カタユウレイボヤを主な材料として、精子活性化・誘引物質(SAAF)がもたらす精子運動活性化と走化性反応の分子機構を調べるとともに、ヒト・マウス等の哺乳類精子が卵及び精漿由来成分にどの程度に運動調節を受けるか、基礎的な研究を行っている。1)SAAF受容体の同定:昨年に引き続きSAAF受容体の精製を行った。SAAFアフィニティカラムを作成し、精子細胞膜画分のタンパク質より精製を試みたところ、約300kDaのタンパク質がSAAFと相互作用することが判った。現在アミノ酸配列の同定を行っている。2)SAAFによる精子鞭毛運動調節機構の解析:運動中精子のイメージングを行う蛍光顕微鏡装置の開発を行い、LEDストロボ照明を用いて毎秒50コマ、1コマ1ミリ秒の速度でイメージングを行うことを可能とした。そして卵より精子誘引物質が精製、同定されているカタユウレイボヤにおいて、走化性時の精子鞭毛運動について詳細な運動解析と細胞内カルシウムイメージングを行い、鞭毛内のカルシウム濃度の一過的な上昇が鞭毛打の対称性を調節し走化性行動を引き起こすことを発見した。3)哺乳類における精子鞭毛運動調節機構の解析:マウスを用いて、精子運動に対する精嚢腺由来物質の阻害効果を研究している。昨年度我々が同定したマウス精子受精能破壊因子セメノクロチンによる精子の受精能阻害機構を調べるため、本年度はセメノクロチンの精子上の受容体を探索した。その結果、セメノクロチン受容体は脂質構成成分であるガングリオシドGMIであることを明らかとした。

借助主要材料，我们正在研究精子激活和吸引力（SAAF）带来的精子运动激活和趋化反应的分子机制，并对诸如人类和小鼠等哺乳动物精子的运动调节进行了基础研究，这是由卵子和精液中的组成部分实现的。 1）SAAF受体的识别：SAAF受体被纯化，如去年一样。制备了SAAF亲和力柱，并从精子细胞膜馏分中的蛋白质进行纯化，发现大约300 kDa的蛋白质与SAAF相互作用。目前，正在鉴定氨基酸序列。 2）分析使用SAAF调制精子鞭毛的机理：我们开发了一种荧光显微镜设备，该设备在运动过程中对精子进行成像，并且可以使用LED strobe Impinination以每秒50帧的速度和每秒50帧的速度进行成像。在卵中，在趋化性和细胞内钙成像过程中，对精子鞭毛运动进行了详细的运动分析和细胞内钙成像。我们发现，鞭毛内钙浓度的瞬时增加可调节鞭毛的对称性，并引起趋化行为。 3）分析哺乳动物精子鞭毛运动的调节机制：用于研究源自人体对精子运动的精液囊泡的抑制作用。为了研究小鼠精子生育能力破坏塞氏菌素的机制，我们去年确定了塞纳克罗汀，今年，我们在切氏蛋白酶精子上搜索了受体。结果，据揭示了塞杂蛋白受体是神经节苷脂GMI，一种脂质成分。