マウス精子の受精に至る全プロセスのリアルタイムイメージング

小鼠精子受精全过程实时成像

• 批准号: 21657055
• 负责人: 広橋 教貴
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Ochanomizu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657055/
• 关键词: 受精; 先体反応; 精子; 開口分泌; 分子イメージング; 卵丘細胞; リアルタイムイメージング; トランスジェニックウス; 卵透明帯

ほ乳類受精成立のプロセスは、おもに4つに区分されている。すなわち、(1)精子の卵透明帯への接着、(2)精子先体反応の誘起、(3)透明帯への侵入、(4)卵細胞膜への融合、である。1つの素過程は次の素過程に移行するために必須であると考えられ、従ってこの受精モデルにもとづいて各素過程に機能する精子側、卵側の分子が長年にわたって探索されてきた。しかし、最近の我々が行った観察では上記素過程の順番が違うことを発見した。つまり(1)→(2)ではなく、(2)→(1)であった。今回、(2)の過程を詳細に解析した。最近、先体反応は多段階的な反応と考えられている。そこで先体反応時の精子細胞膜抗原分子の局在変化、先体胞内容物の露出の経時変化を受精のプロセス中で観察を行った。とくに先体反応の遷移状態を特異的に検出する方法を模索した。この遷移状態は細胞膜と先体胞膜との膜融合が小スケールで多発的に起こった「穿孔」状態と考えられる。よって穿孔を通過できる程度の分子サイズで、かつ特異的に先体胞を染める蛍光プローブを探索した。標的とした先体胞内の抗原分子として、ガラクトース含有糖鎖、sp56/ZP3R,CD46などを選びそれらに対して親和性の高いレクチン.(PNA),抗体を蛍光粒子ビーズに結合させ、精子表面を染めた。さらにこの蛍光プローブビーズを顕微受精の系に入れて、精子が卵に接近する際に精子先体反応の膜状態を可視化することを試みた。その結果、多くの精子は卵丘細胞を通過する際にすでにsp56/ZP3Rや先体反応の主要マーカーであるPNA糖鎖抗原を露出していることがわかった。

Youdaoplaceholder0 milk fertilization establishes プロセス プロセス, お に に4 る に to distinguish されて る る る. す な わ ち, (1) the sperm の eggs transparent 帯 へ の then, (2) the first body sperm 応 の induced, (3) transparent 帯 へ の invasion, and (4) the egg membrane へ の fusion, で あ る. 1 つ の element process の は time element に transitional す る た め に must で あ る と exam え ら れ, 従 っ て こ の fertilization モ デ ル に も と づ い て function of each element process に す る sperm side, egg side の molecular が elder に わ た っ て explore さ れ て き た. <s:1> が <s:1> recently, <s:1> I conducted a 々が visit to った観 to observe the process of the report on で, and followed the が violation of う とを とを and とを. Youdaoplaceholder0 ま ま (1)→(2)で なく なく, (2)→(1)であった. This time, (2) the <s:1> process を detailed に analysis of た. Recently, the prior antithesis 応 応 multi-order な antithesis 応と examination えられて る る. そ こ で body first when the 応 の sperm membrane antigen molecules の bureau in variations, the first body cell contents の reveal の 経 variations change when を fertilization の プ ロ セ ス で in line 観 examine を っ た. Youdaoplaceholder0 precursor reverse 応 <s:1> migration state を specific に検 exit する method を moso た. こ の migration state は membrane と body cell membrane first と の membrane fusion が small ス ケ ー ル で 発 に up more こ っ た "punch" state と exam え ら れ る. を よ っ て perforation by で き る degree の molecular サ イ ズ で, か つ specific に body cell を first dye め る 蛍 light プ ロ ー ブ を explore し た. Mark と し た body first intracellular の antigen molecules と し て, ガ ラ ク ト ー ス contain sugar, sp56 / ZP3R lock, CD46 な ど を choose び そ れ ら に し seaborne て affinity の high い レ ク チ ン. (PNA), antibody を 蛍 light particles ビ ー ズ に combining さ せ dye, sperm surface を め た. さ ら に こ の 蛍 light プ ロ ー ブ ビ ー ズ を 顕 の micro fertilization in に れ て, sperm が eggs に near す る interstate に sperm first body against 応 を の film of visual す る こ と を try み た. そ の results, much く の は sperm egg を mound cells through す る interstate に す で に sp56 / ZP3R や body first against 応 の main マ ー カ ー で あ る PNA sugar lock antigen を reveal し て い る こ と が わ か っ た.

项目成果

ヤリイカの受精戦略2

鱿鱼施肥策略2

• 发表时间: 2010
• 作者: 裏山悟司;滝沢琢己;堀由貴奈;神山淳;中島欽一;広橋教貴
• 通讯作者: 広橋教貴

Real-time observation of the mouse sperm acrosome reaction during in vitro fertilization

体外受精过程中小鼠精子顶体反应的实时观察

• 发表时间: 2010
• 作者: 滝沢琢己;高木美智;伊藤謙治;中島欽一;Hirohashi N
• 通讯作者: Hirohashi N

代替生殖戦術に適応した精子の形態と機能の進化について

精子形态和功能的进化适应替代生殖策略

• 发表时间: 2011
• 作者: 滝沢琢己;高木美智;笹岡寛敏;伊藤謙治;中島欽一;広橋教貴
• 通讯作者: 広橋教貴

マウス精子の先体反応はいつ起こるか?

小鼠精子顶体反应何时发生？

• 发表时间: 2009
• 作者: 広橋教貴

Regulation of Intracellular pH by p90Rsk-dependent Activation of an Na+/H+ Exchanger in Starfish Oocytes

• DOI: 10.1074/jbc.m109.072553
• 发表时间: 2010-07-30
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Harada, Kaori;Fukuda, Eriko;Chiba, Kazuyoshi
• 通讯作者: Chiba, Kazuyoshi