アルツハイマー病βアミロイド線維の試験管内形成及び分解機構の解明

阐明阿尔茨海默病β-淀粉样原纤维的体外形成和分解机制

• 批准号: 12210071
• 负责人: 内木 宏延
• 金额: --
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210071/
• 关键词: アルツハイマー病; βアミロイド線維; 表面プラズモン共鳴法; 重合核依存性重合モデル; 重合速度; 脱重合速度

1.研究の目的。我々はこれまでに、アルツハイマー病βアミロイド線維(fAβ)の試験管内形成過程を、チオフラビンTを用いた分光蛍光定量法、及び閉鎖反応系を駆使して速度論的に解析して来た。その結果、Aβ蛋白からの線維形成過程が重合核依存性重合モデルで説明出来ることを明らかにした。このモデルは重合核形成過程、及び線維伸長過程より成るが、後者の過程は一次反応速度論形式に従う。これは、線維伸長が重合と脱重合の動的平衡過程であること、すなわちfAβの伸長・短縮が、Aβ蛋白の重合核あるいはfAβ断端へのstep by stepな重合、あるいはfAβ断端からのstep by stepな脱重合により起こることを示している。今回、より生体に近いモデルとして、系外からAβ蛋白が供給され続ける開放反応系を構築し、fAβの伸長、及び脱重合機構を解析した。2.成果。表面プラズモン共鳴法(SPR)を用いた反応系を構築した。最初に、重合核となるfAβをセンサーチップ上に固定化した。次いで、リン酸緩衝液(pH7.5)に溶解した各種濃度のAβ蛋白溶液を連続的に添加し、37℃におけるfAβの伸長及び脱重合過程をリアルタイムで測定した。その結果fAβ伸長反応の初速度は、添加したAβ蛋白の濃度に比例した。これは、開放反応系においても、fAβ伸長過程が上記一次反応速度論形式に従うことを示している。さらに、Aβ蛋白を含まない緩衝液を添加すると、fAβが脱重合することを示した。次いで、重合速度と脱重合速度が均衡する濃度(臨界モノマー濃度)を直接測定したところ、約0.2μMであった。3.結語。SPRを用いた開放反応系によってfAβの伸長、および脱重合機構を解析することができた。現在、アポE等の生体分子や種々の有機化合物が上記過程に及ぼす影響を検討している。

1. The purpose of the study. I 々 は こ れ ま で に, ア ル ツ ハ イ マ ー disease beta ア ミ ロ イ ド line d (beta) fA の test tube forming process を, チ オ フ ラ ビ ン T を with い た 蛍 optical spectroscopic quantitative method, and び atresia anti 応 を 駆 make し て speed theory analytical し に て た. そ の results, A beta protein か ら の line d formation が overlap nuclear dependency overlap モ デ ル で instructions out る こ と を Ming ら か に し た. The process of the formation of the coexisting nucleus and the process of the elongation of the び line dimension よ form るが, and the latter <s:1> process <s:1> takes the form of the first anti応 velocity theory に従う. こ れ は, line d elongation が overlap of overlap の dynamic balance process と で あ る こ と, す な わ ち fA beta の elongation, shortening が, A beta protein の overlap あ る い は fA beta end へ の step by step な overlap, あ る い は fA beta end か ら の step by stepな deoverlap によ and な る とを show <s:1> て る る る る る る る る る る る. Born today, back よ り body に nearly い モ デ ル と し て, extrasolar か ら A beta protein が supply さ れ 続 け る open against 応 を build し, fA beta の elongation, and び overlap institutions を parsing し た. 2. Achievements. The surface プラズモ <e:1> resonance method (SPR)を constructs <s:1> た with the た anti応 system を. Initially, に and the coexisting nucleus となるfAβをセ サ サ チップ チップ are に immobile た. Time い で, リ ン acid buffer (pH7.5) dissolve に し た various concentrations の を even 続 に add A beta protein solution し, 37 ℃ に お け る fA beta の elongation of overlapping process and び を リ ア ル タ イ ム で determination し た. The そ <s:1> results showed that the initial velocity of fAβ elongation was 応 <e:1>, the concentration of <s:1> たAβ protein <e:1> was added, and the に ratio of に た was た. こ れ は, open the 応 に お い て も, fA beta elongation process が written form of a theory of reverse 応 speed に 従 う こ と を shown し て い る. さ ら に, A beta protein contains を ま な い buffer を add す る と, fA beta が overlap す る こ と を shown し た. Time い で, coincidence rate と coincidence rate が equilibrium す る concentration (critical モ ノ マ ー concentration) を directly し た と こ ろ, about 0.2 mu M で あ っ た. 3. Conclusion. SPR を with い た open against 応 department に よ っ て fA beta の elongation, お よ び overlap agencies off を parsing す る こ と が で き た. Now, ア ポ e. の gave birth to body molecular や 々 の に が written process of organic compounds and ぼ す influence を beg し 検 て い る.

项目成果

橋本儀一: "実験的アミロイド線維伸長とAGE化β_2^<-m>"腎と骨代謝. 14・1. 31-36 (2001)

桥本义一：“实验性淀粉样原纤维伸长和 AGE 转化 β_2^<-m>”《肾脏和骨代谢》14・1（2001 年）。

Yamaguchi I: "Extension of Aβ2M amyloid fibrils with recombinant human β2-microglobulin."Amyloid : Int J Exp Clin.Invest. (in press). (2001)

Yamaguchi I：“用重组人 β2-微球蛋白延伸 Aβ2M 淀粉样原纤维。”淀粉样蛋白：Int J Exp Clin.Invest（出版中）。

内木宏延: "アミロイドーシス発症の分子機構"腎と骨代謝. 14・1. 7-13 (2001)

内木博宣：“淀粉样变性发生的分子机制”《肾脏与骨代谢》14・1（2001）。

長谷川一浩: "Alzheimer病βアミロイド線維形成の基礎"最新医学. 55・7. 1590-1595 (2000)

Kazuhiro Hasekawa：“阿尔茨海默病中β-淀粉样原纤维形成的基础”现代医学55・7（2000）。