アルツハイマー病βアミロイド線維の試験管内形成及び分解機構の解明

阐明阿尔茨海默病β-淀粉样原纤维的体外形成和分解机制

• 批准号: 12210071
• 负责人: 内木 宏延
• 金额: --
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210071/
• 关键词: アルツハイマー病; βアミロイド線維; 表面プラズモン共鳴法; 重合核依存性重合モデル; 重合速度; 脱重合速度

1.研究の目的。我々はこれまでに、アルツハイマー病βアミロイド線維(fAβ)の試験管内形成過程を、チオフラビンTを用いた分光蛍光定量法、及び閉鎖反応系を駆使して速度論的に解析して来た。その結果、Aβ蛋白からの線維形成過程が重合核依存性重合モデルで説明出来ることを明らかにした。このモデルは重合核形成過程、及び線維伸長過程より成るが、後者の過程は一次反応速度論形式に従う。これは、線維伸長が重合と脱重合の動的平衡過程であること、すなわちfAβの伸長・短縮が、Aβ蛋白の重合核あるいはfAβ断端へのstep by stepな重合、あるいはfAβ断端からのstep by stepな脱重合により起こることを示している。今回、より生体に近いモデルとして、系外からAβ蛋白が供給され続ける開放反応系を構築し、fAβの伸長、及び脱重合機構を解析した。2.成果。表面プラズモン共鳴法(SPR)を用いた反応系を構築した。最初に、重合核となるfAβをセンサーチップ上に固定化した。次いで、リン酸緩衝液(pH7.5)に溶解した各種濃度のAβ蛋白溶液を連続的に添加し、37℃におけるfAβの伸長及び脱重合過程をリアルタイムで測定した。その結果fAβ伸長反応の初速度は、添加したAβ蛋白の濃度に比例した。これは、開放反応系においても、fAβ伸長過程が上記一次反応速度論形式に従うことを示している。さらに、Aβ蛋白を含まない緩衝液を添加すると、fAβが脱重合することを示した。次いで、重合速度と脱重合速度が均衡する濃度(臨界モノマー濃度)を直接測定したところ、約0.2μMであった。3.結語。SPRを用いた開放反応系によってfAβの伸長、および脱重合機構を解析することができた。現在、アポE等の生体分子や種々の有機化合物が上記過程に及ぼす影響を検討している。

1。研究目标。我们先前已使用硫非类固醇T和封闭的反应系统分析了阿尔茨海默氏病β-淀粉样蛋白纤维（FAβ）的体外形成过程。结果，揭示了Aβ蛋白的纤维化形成过程可以通过聚合核依赖性聚合模型来解释。该模型由聚合成核过程和纤维扩展过程组成，但是后一个过程遵循一阶动力学形式。这表明纤维延伸是聚合和解聚化的动态平衡过程，即FAβ的扩展和缩短通过Aβ蛋白的分步聚合到聚合核或FAβ核或FAβPypypypypypoligation的分级聚合而发生。在本文中，作为一个接近生物体的模型，我们构建了一个开放反应系统，其中Aβ蛋白是从系统外部连续提供的，并分析了FAβ的伸长和解聚机制。 2。结果。使用表面等离子体共振（SPR）构建反应系统。首先，将聚合核FAβ固定在传感器芯片上。接下来，连续添加溶解在磷酸盐缓冲液中的各种浓度的Aβ蛋白溶液，并实时测量37°C时FAβ的伸长和解聚过程。结果，FAβ扩展反应的初始速率与添加的Aβ蛋白的浓度成正比。这表明即使在开放反应系统中，FAβ扩展过程也遵循上述原发性动力学形式。此外，当添加含有Aβ蛋白的缓冲液时，可以实现FAβ解聚化。接下来，当直接测量聚合速率和解聚速率的浓度（临界单体浓度）时，约为0.2μm。 3。结论。 FAβ的伸长率和解聚机制可以通过使用SPR的开放反应系统分析。目前，正在研究诸如APOE和各种有机化合物对上述过程的生物分子的影响。

项目成果

橋本儀一: "実験的アミロイド線維伸長とAGE化β_2^<-m>"腎と骨代謝. 14・1. 31-36 (2001)

桥本义一：“实验性淀粉样原纤维伸长和 AGE 转化 β_2^<-m>”《肾脏和骨代谢》14・1（2001 年）。

長谷川一浩: "Alzheimer病βアミロイド線維形成の基礎"最新医学. 55・7. 1590-1595 (2000)

Kazuhiro Hasekawa：“阿尔茨海默病中β-淀粉样原纤维形成的基础”现代医学55・7（2000）。

Yamaguchi I: "Extension of Aβ2M amyloid fibrils with recombinant human β2-microglobulin."Amyloid : Int J Exp Clin.Invest. (in press). (2001)

Yamaguchi I：“用重组人 β2-微球蛋白延伸 Aβ2M 淀粉样原纤维。”淀粉样蛋白：Int J Exp Clin.Invest（出版中）。

内木宏延: "アミロイドーシス発症の分子機構"腎と骨代謝. 14・1. 7-13 (2001)

内木博宣：“淀粉样变性发生的分子机制”《肾脏与骨代谢》14・1（2001）。