神経変性における病因遺伝子産物構造変化の解析

神经退行性疾病致病基因产物的结构变化分析

• 批准号: 12210154
• 负责人: 貫名 信行
• 金额: --
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210154/
• 关键词: ポリグルタミン; CAGリピート病; ハンチントン病; 構造生物学; アミロイド; ベーターシート

1)ポリグルタミン発現誘導細胞において可溶性ポリグルタミン融合蛋白(16Q,,60Q,150Q)を免疫沈降してそのイムノブロットをHDJ1,HDJ2,HSP70,HSC70の抗体によって染色した。異なる長さのポリグルタミン鎖を発現した細胞からポリグルタミン融合蛋白を免疫沈降したところ150Qを発現した細胞からの免疫沈降ではイムノブロットによってHDJ1,HDJ2,HSP70,HSC70が結合していることが確認された。このことはこれらのHSPがポリグルタミン鎖の伸長によって引き起こされる構造異常を認識していることを示唆している。2)ポリグルタミン鎖を安定性の極めて高い蛋白質の一つであるマッコウクジラミオグロビンへ挿入し、ポリグルタミン鎖の構造およびポリグルタミン挿入に伴う蛋白質の構造についてCD、IR、常磁性NMRをもちいて検討した。ミオグロビンに12Q,28Q,35Q,50Qを挿入した融合蛋白を作成した。これらの融合蛋白はミオグロビンの安定性から純度の高い精製が可能であった。1C2抗体によるイムノブロットを行ったところ28Q,35Q,50Qを挿入した変異ミオグロビンが認識され、挿入ポリグルタミンが疾患関連の構造を取っていることが示唆された。CD,IRの検討結果はwild typeとの差スペクトルにおいてポリグルタミン伸長に伴うピークを確認できた。これらの結果からポリグルタミンの伸長に伴い分子内βsheet構造と分子間βsheet構造を取ることが示唆された。NMRによる検討の結果はミオグロビンのコアーの部分の構造には影響が少ないことが示された。さらにポリグルタミンの挿入に伴う分子の不安定性がアミロイド形成に寄与している所見を得ている。

1) ポ リ グ ル タ ミ ン 発 now cells induced に お い て soluble ポ リ グ ル タ ミ ン fusion protein (q, 16 and 60 q, 150 q) を immune sink し て そ の イ ム ノ ブ ロ ッ ト を HDJ1, HDJ2, HSP70, HSC70 の antibody に よ っ て dyeing し た. Different な る long さ の ポ リ グ ル タ ミ ン lock を 発 now し た cells か ら ポ リ グ ル タ ミ ン fusion protein を immune sink し た と こ ろ 150 q を 発 now し た cells か ら の immune sink で は イ ム ノ ブ ロ ッ ト に よ っ て HDJ1, HDJ2, HSP70, HSC70 が combining し て い る こ と が confirm さ れ た. こ の こ と は こ れ ら の HSP が ポ リ グ ル タ ミ ン lock の elongation に よ っ て lead き up こ さ れ る tectonic anomaly を know し て い る こ と を in stopping し て い る. 2) ポ リ グ ル タ ミ ン lock を stability の め extremely high て い protein の a つ で あ る マ ッ コ ウ ク ジ ラ ミ オ グ ロ ビ ン へ scions into し, ポ リ グ ル タ ミ ン の lock structure お よ び ポ リ グ ル タ ミ ン scions into に with う protein の tectonic に つ い て CD, IR, NMR を magnetic も ち い て beg し 検 た. Youdaoplaceholder1 グロビ に に12Q,28Q,35Q,50Qを insert the <s:1> た fusion protein を to make <s:1> た. The <s:1> れら <s:1> fusion protein <s:1> グロビ グロビ グロビ グロビ <s:1> stability ら ら high purity <e:1> <s:1> refined が possible であった. 1 c2 antibody に よ る イ ム ノ ブ ロ ッ ト を line っ た と こ ろ 28 q, q, 35 to 50 q を scions into し た - different ミ オ グ ロ ビ ン が know さ れ, scions into ポ リ グ ル タ ミ ン masato が disease even の tectonic を take っ て い る こ と が in stopping さ れ た. Beg the CD, IR の 検 は wild type と の poor ス ペ ク ト ル に お い て ポ リ グ ル タ ミ ン elongation に with う ピ ー ク を confirm で き た. こ れ ら の results か ら ポ リ グ ル タ ミ ン の beta sheet in the elongation に with い molecular structure と beta sheet between the molecules を take る こ と が in stopping さ れ た. The NMRによる検 results of the <s:1> show that the <s:1> に グロビ グロビ グロビ グロビ <s:1> コア <s:1> the <s:1> part of the <s:1> has a に に influence が less な the な とが とが とが された shows された. さ ら に ポ リ グ ル タ ミ ン の scions into molecular の に with う labile が ア ミ ロ イ ド に send and し て い を る had seen too て い る.

项目成果

貫名信行: "Annual Review神経2000 2.CAGリピート病と核内封入体"中外医学社. 8-14 (2000)

Nobuyuki Nukina：“神经病学年度评论 2000 2. CAG 重复疾病和核包涵体”Chugai Igakusha 8-14 (2000)。

Uchida,Y.: "Sandwich ELSA for the measurement of Apo-E4 levels in serum and the estimation of the allelic status of Apo-E4 isoforms."J.Clin.Lab.Anal.. 14. 260-264 (2000)

Uchida,Y.：“三明治 ELSA 用于测量血清中的 Apo-E4 水平并估计 Apo-E4 亚型的等位基因状态。”J.Clin.Lab.Anal.. 14. 260-264 (2000)

Nagao,Y.: "DMSO and glycerol reduce bacterial death induced by expression of truncated N-terminal huntingtin with expanded polyglutamine tracts."Biochim Biophys Acta. 1502. 247-256 (2000)

Nagao,Y.：“DMSO 和甘油可减少由表达截短的 N 末端亨廷顿蛋白和扩展的聚谷氨酰胺束诱导的细菌死亡。”Biochim Biophys Acta。

Wang,G-H.: "Ataxin-3, the MJD1 gene product, interacts with the two human homologs of yeast DNA repair protein RAD23, HHR23A and HHR23B."Hum.Mol.Genet.. 9. 1795-1803 (2000)

Wang,G-H.：“Ataxin-3，MJD1 基因产物，与酵母 DNA 修复蛋白 RAD23、HHR23A 和 HHR23B 的两个人类同源物相互作用。”Hum.Mol.Genet.. 9. 1795-1803 (2000)

Iwata,A.: "α-synuclein forms a complex with transcription factor Elk-1."J.Neurochem.. (in press).

Iwata, A.：“α-突触核蛋白与转录因子 Elk-1 形成复合物。”J. Neurochem..（正在出版）。