癌細胞株を用いたcDNAプロファイリングによる新規癌関連遺伝子の検索

使用癌细胞系通过 cDNA 分析寻找新的癌症相关基因

• 批准号: 12213130
• 负责人: 原田 晴仁
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213130/
• 关键词: LOH; 癌関連遺伝子; 癌細胞株; EST; cDNA; プロファイリング

我々の教室では乳癌や肝癌を中心にLOH解析を行ってきた結果、17q25.1,4q21-22,16q24.2,6q21,6q25.3の5領域それぞれに、約1cMの共通欠失領域を同定している。これら5領域からの癌関連遺伝子の単離を目的に種々の癌細胞株で発現異常を示す同領域内のESTを癌関連候補遺伝子と考え、新規癌関連遺伝子を単離を試みた。18組織119株の癌細胞株を入手しmRNAからcDNAの合成を完了した。発現解析の対象と成るESTは各領域それぞれ約40、合計200あまりのESTで、半定量的RT-PCR法にて現在までに91のESTの解析を終えintegrin β4 subunit,JNK3,osteopontin,protein tyrosine phosphataseを含む16ESTに発現の極端な減弱、消失を確認している。発現異常を示す17q25領域の二つのESTからオリゴキャッブ法により作製された完全長cDNAライブラリーのスクリーニングや5′RACE法によりそれぞれ新規遺伝子を単離した。一つは7回膜貫通ドメインを持つ442アミノ酸からなる蛋白(DMHC1)で、もう一つは一回膜貫通ドメインを持つ778アミノ酸からなる蛋白(DMC1)〓あった。DMC1に間しては、肝癌、肺癌、乳癌を中心をした癌細胞株のcDNAを対象にPCR-SSCP法にて変異検索を行っておりいままでのところ、同義置換を確認している。癌との関連が示唆される既知の遺伝子が含まれていた。JNK3については、そのゲノム構造を決定し、36頭蓋内腫瘍を対象に、integrin β4 subunitに関しては、47乳癌を対象に変異検索を行い、いずれの遺伝子においても新規一塩基多型(SNP)を確認している。また肝癌や肝芽腫にて高頻度にLOHを認める4q21-22領域のESTからも現在新規cDNAをクローニング中である。今後、新規癌関連遺伝子の単離を継続すると共に、今回単離した遺伝子の構造解析や手術検体における変異解析および組み換え蛋白技術や細胞生物学的技術を用いた機能解析より、癌との関係を検討する予定である。

The LOH analysis results for breast cancer and liver cancer center in our classroom show that there are 5 common missing areas in 17q25.1, 4q21 - 22, 16q24.2, 6q21, 6q25.3, and about 1cM. The 5-domain cancer-related gene expression pattern is isolated from the target, and the abnormal expression pattern is displayed in the cancer cell line. The EST in the same domain is cancer-related candidate gene expression pattern. The new cancer-related gene expression pattern is isolated from the target. The synthesis of mRNA and cDNA was completed in 18 tissues and 119 cancer cell lines The analysis of ESTs detected in each domain was about 40, totaling 200 ESTs. Semi-quantitative RT-PCR method was used to analyze 91 ESTs. The analysis of integrin β4 subunit, JNK3,osteopontin,protein tyrosine phosphatase, including 16 ESTs, was confirmed to be extremely weak and disappeared. The abnormal expression was found in the 17q25 domain of EST, which was used to control the complete long cDNA sequence and 5′RACE. A film through the film. DMC1 is used to detect cDNA from cancer cell lines such as liver cancer, lung cancer, and breast cancer. PCR-SSCP method is used to detect cDNA from different genes. The relationship between cancer and cancer has been studied. JNK3 is a new gene for breast cancer. It is a new gene for breast cancer. It is a new gene for breast cancer. Liver cancer, liver bud, high frequency LOH, EST, cDNA, cDNA In the future, new regulations on the separation of cancer-related genes, structural analysis of genes, differential analysis of surgical models, and application of protein technology and cell biology technology will be introduced.

项目成果

Nagai,H.,Harada,H. et al.: "Nine novel single-nucleotide polymorphisms of the Intergrin beta4 gene in the Japanese population."J.Hum.Genet.. 46. 35-37 (2001)

永井 H.,原田 H.

Harada,H.,Nagai,H. et al.: "Molecular cloning, tissue expression, and chromosomal assignment of a novel gene encoding a subunit of the human signal-recognition particle."J.Hum.Genet.. 46. 70-75 (2001)

原田 H.，永井 H.

Harada,H.,Nagai,H. et al.: "Down-regulation in multiple human cancers of a novel gene from 17q25.1 that encodes and integral membrane protein."Jpn.J.Cancer Res.. 1-6 (2001)

原田 H.，永井 H.

Harada,H.,Ishigami,T. et al.: "Human calcitonin receptor-like receptor for adrenomedullin : genomic structure, eight single-nucleotide polymorphisms, and haplotype analysis."J.Hum.Genet.. 46. 132-136 (2001)

原田 H.、石上 T.

Harada,H.,Nagai,H. et al.: "Identification of DMC1,a novel gene in the TOC region on 17q25.1, that shows loss of expression in multiple human cancers."J.Hum.Genet.. 46. 90-95 (2001)

原田 H.，永井 H.