TCF4とβ-catenin複合体により転写活性化される遺伝子群の同定

TCF4 和 β-catenin 复合物转录激活基因的鉴定

• 批准号: 12213157
• 负责人: 山田 哲司
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213157/
• 关键词: P-glycoprotein; multidrug resistance-1 (MDR1) gene; β-catenin; T-cell factor-4; 大腸発がん; 家族性大腸腺腫症

β-cateninとTCF4転写複合体形成により発現される標的遺伝子群を同定し、大腸発がんの分子生物学的な機構を解明するために、テトラサイクリン調節性プロモータによる発現誘導システムを用い、テトラサイクリンの添加でβ-cateninとの結合部位を欠きdominant-negativeにTCF4の転写活性を抑制するTCF4BΔN30を発現誘導できる大腸がん細胞DLD-1 Tet-ON TCF4B ΔN30を樹立した。2色蛍光プローブによるcDNA microarray hybridization法で約7000遺伝子、Affymetrix社製のGeneChip法で約5600遺伝子についてテトラサイクリン誘導前後での発現変化を解析した。その結果、dominant-negative TCF4の誘導にて発現抑制される遺伝子としてMultidrug resistance gene-1(MDR1)を同定した。MDR1遺伝子のプロモーター領域には複数のβ-catenin/TCF4応答部位があり、実際に家族性大腸腺腫症患者の腺腫組織でβ-cateninの細胞内蓄積と相応したMDR1遺伝子産物p-glycoproteinの発現亢進を証明した。MDR1遺伝子は大腸上皮細胞においてβ-cateninとTCF4の転写複合体の直接の標的遺伝子の一つであると結論した。MDR1遺伝子産物p-glycoproteinの発現抑制、あるいは機能阻害により大腸腺腫形成を抑制にし、特に外科的切除を行わなければ確実に発癌に至る家族性大腸腺腫症患者や大腸癌の高危険群での発症予防への応用が期待できる。

为了鉴定由β-catenin和TCF4转录复合物形成表达的靶基因，并阐明了结肠癌的分子生物学机制，我们使用了一个表达诱导系统，使用四环素调节的启动子来建立DLD-1，TET-1，TET-1，TCF4BΔN330和β-CATINC的活性，该启动子可以建立dld-1，β-CATINC抑制了β-c-cats，β-CATC-cATINF temins cat tect andc-catc-cats cat trift teminc- in a dominant-negative manner, using a colon cancer cell DLD-1, Tet-ON, and TCF4B ΔN30, which suppresses transcriptional activity of TCF4, using a tetracycline-regulated promoter, and was able to induce expression of TCF4BΔN30, which lacks a binding site with β-catenin and suppresses transcriptional activity of TCF4 in a dominant-negative manner.使用两色荧光探针使用cDNA微阵列杂交方法分析了大约7,000个基因的表达变化，并使用Affymetrix在四环素诱导之前和之后使用Affymetrix制造的Genechip方法分析了大约5,600个基因。结果，多药抗性基因1（MDR1）被鉴定为通过诱导显性阴性TCF4抑制的基因。 MDR1基因的启动子区域包含多个β-catenin/tcf4反应位点，实际上，事实证明，MDR1基因产物P-糖蛋白的表达对应于家族性腺瘤患者腺瘤组织中β-catenin的细胞内积累。我们得出的结论是，MDR1基因是结肠上皮细胞中β-catenin和TCF4转录复合物的直接靶基因之一。 MDR1基因产物P-糖蛋白或功能抑制的表达抑制了结肠腺瘤的形成，预计将应用它来防止家族性腺瘤或高风险的结肠癌组的发作，这可以导致无手术切除而导致癌症。

项目成果

Naishiro Y,Yamada T. et al.: "Restoration of epithelial cell polarity in a colorectal cancer cell line by suppression of beta-catenin/T-cell factor 4-mediated gene transactivation."Cancer Res.. (In press). (2001)

Naishiro Y、Yamada T. 等人：“通过抑制 β-连环蛋白/T 细胞因子 4 介导的基因反式激活来恢复结直肠癌细胞系中的上皮细胞极性。”Cancer Res..（正在出版）。

Niki T,Yamada T. et al.: "Expression of vascular endothelial growth factors A,B,C,and D and their relationships to lymph node status in lung adenocarcinoma."Clin.Cancer Res.. 6(6). 2431-2439 (2000)

Niki T、Yamada T. 等人：“肺腺癌中血管内皮生长因子 A、B、C 和 D 的表达及其与淋巴结状态的关系。”Clin.Cancer Res. 6(6)。

Yamada T. et al..: "Transactivation of the multidrug resistance 1 gene by T-cell factor 4/beta-catenin complex in early colorectal carcinogenesis."Cancer Res.. 60(17). 4761-4766 (2000)

Yamada T. 等人：“早期结直肠癌发生中 T 细胞因子 4/β-连环蛋白复合物对多药耐药 1 基因的反式激活”。Cancer Res.. 60(17)。

Ishii Y,Yamada T. et al.: "Integrin alpha6 beta4 as a suppressor and a predictive marker for peritoneal dissemination in human gastric cancer."Gastroenterology. 118(3). 497-506 (2000)

Ishii Y、Yamada T. 等人：“整合素 alpha6 beta4 作为人类胃癌腹膜播散的抑制因子和预测标记。”胃肠病学。

Araki N,Yamada T. et al.: "Actinin-4 is preferentially involved in circular ruffling and macropinocytosis in mouse macrophages : analysis by fluorescence ratio imaging."J.Cell Sci.. 113(Pt 18). 3329-3340 (2000)

Araki N、Yamada T. 等人：“Actinin-4 优先参与小鼠巨噬细胞中的圆形褶皱和巨胞饮作用：通过荧光比率成像进行分析。”J.Cell Sci.. 113（Pt 18）。