ハイスループットモノクローナル抗体取得法に関する研究
高通量单克隆抗体获取方法研究
基本信息
- 批准号:12875153
- 负责人:
- 金额:$ 1.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 2001
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
これまで抗体分子で無細胞タンパク質合成系による報告があるものは、L鎖とH鎖の可変領域(Fv)を人工的なリンカー配列で結合させた単鎖Fvだけであった。本萌芽研究の成果により、無細胞タンパク質合成系の反応条件を最適化することで、H鎖L鎖の定常領域をするFab断片の合成に成功した。用いたFabはエステラーゼ活性を有する触媒抗体であり、無細胞系で合成されたものは、L鎖とH鎖との間で分子間のジスルフィド結合を有し、ハイブリドーマより合成されたものと同等の結合認識能力および触媒活性をしていた。一般にモノクローナル抗体を組み換え微生物で発現させる場合、単鎖Fv化すると本来の機能が損なわれることがあること、またFabの方が単鎖Fvより構造的に安定であることが知られている。今回2本のペプチド鎖をコードする遺伝子から、直接活性を有する抗体断片を試験管内の反応で合成できたことの意義は大きい。一方マウスのL鎖cDNAを大部分増幅できるような縮重プライマーを設計した。これを用いて上記Fab遺伝子の転写mRNA約1分子からのRT-PCRによる増幅に成功した。さらに全く別の抗体を産生するハイブリドーマ1細胞より、逆転写反応とPCR反応を連続的に行い、抗体のL鎖遺伝子(cDNA)を増幅することに成功した。今後ハイブリドーマ細胞ではなく、B細胞からの増幅や、L鎖H鎖の同時増幅が可能になれば、ハイブリドーマ法に代わる手法となることが期待される。
The antibody molecule is a cell-free peptide synthesis system. It is reported that the antibody molecule is bound to a variable domain (Fv). The results of this study were successful in optimizing the reaction conditions of cell-free plasmid synthesis system and in synthesizing Fab fragments in the steady state domain of H-lock. The ability to bind to the same molecule in a cell-free system. In general, when the antibody is assembled and the microorganism is discovered, the original function of the Fv is lost, and the Fab is stable. This paper presents the significance of the synthesis of antibody fragments in the assay tube by using the DNA sequence and direct activity of the antibody fragments. Most of the time, it's not easy. The PCR amplification of Fab gene was successful. All antibodies were produced successfully in the presence of DNA, PCR and DNA. In the future, B cells will increase in amplitude, L locks will increase in amplitude, and B cells will increase in amplitude.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Jiang, X., Nakano H., Ookubo, Y., Fujii, I., Yamane, T.: "Expression of Fab fragment of catalytic antibody 6D9 in an Escherichia coli in vitro coupled transcription/translation system"FEBS Letters. (in press).
Jiang,X.,Nakano H.,Ookubo,Y.,Fujii,I.,Yamane,T.:“在大肠杆菌体外偶联转录/翻译系统中催化抗体 6D9 的 Fab 片段的表达”FEBS Letters。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Jiang, X., Oohira, K., Iwasaki, Y., Nakano H., Ichikawa, Yamane, T.: "Reduction of protein degradation by use of protease-deficient mutants in cell-free protein syntheis system of Escherichia coli"Journal of Bioscience and Bioengineering. 93(2). 111-116 (
Jiang,X.,Oohira,K.,Iwasaki,Y.,Nakano H.,Ichikawa,Yamane,T.:“在大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中使用蛋白酶缺陷突变体减少蛋白质降解”期刊
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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