ヒトモノクローナル抗体のハイスループット取得法の開発

人单克隆抗体高通量获取方法的开发

• 批准号: 19656218
• 负责人: 中野 秀雄
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19656218/
• 关键词: 一細胞RT-PCR; 無細胞タンパク質合成系; ヒトモノクローナル抗体

研究代表者らが開発したSICREX法(免疫細胞1個由来のわずか数十コピーのmRNAを対象として、RT-PCRによりL鎖とH鎖のHd部分をそれぞれ増幅させ、連続的に無細胞タンパク質合成系を用いることで、マイクロプレート上だけの反応で細胞1個より、抗体分子(Fab断片)を合成できる技術)を用いて、ヒト抗体の網羅的解析を可能にするためのプラットフォーム作りを行うことを目的とし、その基盤作りを行った。昨年度の研究成果に基づき、抗原を固定化した磁気ビーズにより、抗原特異的抗体を細胞表面に提示している細胞を濃縮し(プレセレクション)、効率的にモノクローナル抗体を取得する方法をヒト抗体に対して応用した。また抗原としてヒトB型肝炎ウイルスの表面抗原であるS100ペプチドを用いた。ワクチンを接種した健常人から末梢血を採取し、抗原ビーズにより選択後、SICREX法によりモノクローナル抗体を合成し、ELISA法により選択した。得られた数種の抗体遺伝子の配列を決定し、それらがヒト抗体であることを確認した。さらに親和性を調べ、特異的抗体であることを確認した。これらの研究成果により、ヒトモノクローナル抗体をわずか数日で、迅速に取得する技術を確立できた。この技術は現在注目されている抗体医薬の迅速な開発に役立つだけでなく、ヒト免疫システムの総括的理解を深める非常に有用なツールになると期待される。

Research representatives ら が open 発 し た SICREX method (immune cells in 1 origin の わ ず か dozens コ ピ ー の mRNA を like と seaborne し て, rt-pcr に よ り と H L lock lock の Hd part を そ れ ぞ れ rights of さ せ, even 続 に cell free タ ン パ ク qualitative GeChengXi を with い る こ と で, マ イ ク ロ プ レ ー ト on だ け の anti 応 で cell 1 よ り, antibody molecules (Fab) fragment を synthetic で き る) を with い て, ヒ ト antibody の snare resolution を may に す る た め の プ ラ ッ ト フ ォ ー ム as り を line う こ と を purpose と し, そ の base plate り を line っ た. Yesterday annual の research に base づ き, antigen を immobilized し た magnetic 気 ビ ー ズ に よ り, を cell surface antigen specific antibody に prompt し て い を enrichment し る cells (プ レ セ レ ク シ ョ ン), the working rate of に モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies を す obtain る method を ヒ ト antibody に し seaborne て 応 with し た. Youdaoplaceholder0 antigen と <s:1> てヒト てヒト hepatitis B ウ ス ス <s:1> surface antigen であるS100ペプチドを use また た. ワ ク チ ン を vaccination し た healthy normal か ら peripheral blood を し, antigen ビ ー ズ に よ り after sentaku, SICREX に よ り モ ノ ク ロ ー ナ を synthetic し ル antibodies, ELISA method に よ り sentaku し た. Youdaoplaceholder0 several <s:1> antibody sequeles 伝 are paired with を to determine <s:1>, and それらがヒト antibodies である とを とを とを confirm た. Youdaoplaceholder0 affinity を modulates べ, and specific antibodies である た とを confirm た. こ れ ら の research に よ り, ヒ ト モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を わ ず か days で, quickly に す る technology を establish で き た. こ の technology は now attention さ れ て い る antibody medical 薬 の な quickly open 発 に servants made つ だ け で な く, ヒ ト immune シ ス テ ム の 総 enclosed deep understanding を め る very useful に な ツ ー ル に な る と expect さ れ る.

项目成果

A novel strategy for generation of a monoclonal antibody from single antibody-producing cells using RT-PCR ad a cell-free protein synthesis system.

使用 RT-PCR 和无细胞蛋白质合成系统从单个抗体产生细胞生成单克隆抗体的新策略。

• 发表时间: 2007
• 作者: 荒井一慶;兒島孝明;佐藤ちひろ;北島健;中野秀雄;中野秀雄
• 通讯作者: 中野秀雄

-細胞RT-PCRと無細胞蛋白質合成系による抗ガングリオシド抗体の取得

- 利用细胞RT-PCR和无细胞蛋白质合成系统获得抗神经节苷脂抗体

• 发表时间: 2008
• 作者: 荒井一慶;兒島孝明;佐藤ちひろ;北島健;中野秀雄
• 通讯作者: 中野秀雄