破骨細胞分化とB細胞分化のクロストーク:RANKLによるプレB細胞分化制御

破骨细胞分化和 B 细胞分化之间的串扰：RANKL 对前 B 细胞分化的调节

• 批准号: 12877055
• 负责人: 工藤 明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877055/
• 关键词: B細胞分化; Pax-5; 再構成; IL-7; Rb

プレB細胞株PreBR1とPreBR2はすでにH鎖の再構成に成功しており、細胞表面にプレB細胞レセプター(preBCR)を発現している。このプレB細胞株はインターロイキン7(IL-7)存在下で長期培養でき、IL-7を除去するとκ鎖再構成が誘導され、IgM陽性の未熟B細胞へ効率良く分化する。はじめにKI、KII部位に対するPax-5の親和性をゲルシフト法の競合実験で調べた。IL-7存在下のプレB細胞でPax-5はPax-5の代表的な標的遺伝子であるCD19プロモーター部位に比べ、KI、KII部位には1/20程度で結合していることが明らかになった。また、IL-7を除き未熟B細胞へ分化させ、KI、KII部位への結合を追跡すると、KI、KII部位におけるPax-5の結合は特にKI部位において著しく減少していた。さらに、この現象がPax-5のタンパク質レベルの発現減少によるためかどうかを調べるためにウェスタンブロットまたはフローサイトメトリーを行った結果、Paxc-5の発現量またはPax-5のターゲット遺伝子であるCD19の発現量に変化はなかった。これらの結果より、プレB細胞が未熟B細胞へ分化したときにPax-5は何か他の分子と結合し、そのために結合の弱いKI、KII部位から離れていくのではないかと考えられた。このとき、分化した細胞の大きさは小さくなり、細胞周期は停止していたので、この過程にはRbによる制御が考えられた。Pax-5は脱リン酸化したRbと結合できるという報告もあることから、ウェスタンブロットを行いRbのリン酸化状態を調べるとプレB細胞から未熟B細胞へ分化したとき、Rbのリン酸化は消失していた。そこで、抗Rb抗体を用いて免疫沈降行うと未熟B細胞へ分化したときのみPax-5はRbと結合していることが明らかとなった。以上の実験結果から、プレB細胞が分化したときPax-5はKI、KII部位から離れ、脱リン酸化したRbと結合していることが明らかになった。このことより、Pax-5はRbとの共同作用によりκ鎖再構成に関与していることが考えられる。

プ レ B cell lines PreBR1 と PreBR2 は す で に H lock again の に successful し て お り, cell surface に プ レ B cells レ セ プ タ ー (preBCR) を 発 now し て い る. こ の プ レ B cell lines は イ ン タ ー ロ イ キ ン 7 (IL - 7) in the presence of long-term training で で き, IL - 7 を remove す る と kappa lock again predominate constitute が induced さ れ, IgM の unripe B cells could promote behavior rate good く へ す る. Youdaoplaceholder1 じめにKI and KII parts に for するPax-5 <s:1> affinity をゲ シフト シフト シフト method <s:1> competitive and cooperative experimental で adjustment べた. The presence of IL - 7 の プ レ B cells は Pax で Pax - 5-5 の な mark of representative 伝 son で あ る CD19 プ ロ モ ー タ に ー parts than べ, KI, KII に は 1/20 degree で combining し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, IL - 7 を except き unripe B cells へ さ せ, KI, KII へ の combining を tracing す る と, KI, KII に お け る Pax - 5 の combining は, に KI parts に お い て in し く reduce し て い た. さ ら に, こ が Pax の phenomenon - 5 の タ ン パ ク qualitative レ ベ ル の 発 now reduce に よ る た め か ど う か を adjustable べ る た め に ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト ま た は フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー を line っ た result, Paxc - 5 の 発 now quantity ま た は Pax - 5 の タ ー ゲ ッ ト heritage 伝 son で あ る CD19 の 発 quantity に now - the は な か っ た. こ れ ら の results よ り, プ レ B cells が unripe B cells へ し た と き に Pax - 5 は か his の molecular と し, そ の た め に combined with weak の い KI and KII か ら from れ て い く の で は な い か と exam え ら れ た. こ の と き, differentiation し た cells の big き さ は small さ く な は り, cell cycle stop し て い た の で, こ の process に は Rb に よ る suppression が exam え ら れ た. Pax - 5 は リ off ン acidification し た Rb と combining で き る と い う report も あ る こ と か ら, ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line い Rb の リ ン acidification condition を adjustable べ る と プ レ B cells か ら unripe B cells へ し た と き, Rb の リ ン acidification は disappear し て い た. そ こ で, resistance Rb antibody を い て immune sink line う と unripe B cells へ し た と き の み Pax - 5 は Rb と combining し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. Results above の be 験 か ら, プ レ B cells が し た と き Pax - 5 は KI and KII か ら from れ, リ ン acidification し た Rb と combining し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. The に relationship between the reformation of によ <s:1> κ lock and <s:1> て る る る とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが えられる is studied えられる.

项目成果

Kaji,K.: "The gamete fusion process is defective in eggs of Cd9-deficient mice."Nat.Genet.. 279-282 (2000)

Kaji,K.：“Cd9 缺陷小鼠的卵子中配子融合过程存在缺陷。”Nat.Genet.. 279-282 (2000)

竹下淳,工藤明: "リコンビナント医薬品 医学・薬学研究者のためのバイオテクノロジー概論"医薬ジャーナル社. (2000)

Jun Takeshita、Akira Kudo：“重组药物：医学和药物研究人员的生物技术简介”Iyaku Journal Inc. (2000)

Kawaguchi,J.: "The transition of cadherin expression in osteoblast differentiation from mesenchymal cells : consistent expression of cadherin-11 in osteoblast lineage."J.Bone Miner.Res.. 16-2. 260-269 (2001)

Kawaguchi, J.：“从间充质细胞分化成成骨细胞时钙粘蛋白表达的转变：成骨细胞谱系中钙粘蛋白-11 的一致表达。”J.Bone Miner.Res. 16-2。

Kaji,K.: "Functional association of CD9 with the Fc γ III receptor in macrophages."J.Immunol.. (in press). (2001)

Kaji, K.：“CD9 与巨噬细胞中 Fc γ III 受体的功能关联。”J.Immunol..（出版中）。

新井智,工藤明: "骨髄支持細胞におけるストローマ細胞の役割、医学のあゆみ"医歯薬出版. 5 (2000)

Satoshi Arai、Akira Kudo：“基质细胞在骨髓支持细胞中的作用，医学史”Ishiyaku Publishing 5（2000）。