メダカヒレ再生関連遺伝子の網羅的スクリーニングとゲノムマッピング

青鳉鳍再生相关基因的全面筛选及基因组图谱

• 批准号: 14011215
• 负责人: 工藤 明
• 金额: $ 3.9万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011215/
• 关键词: ヒレ再生; メダカ; EST; マイクロアレイ; 再生芽

これまでに再生芽にfgfr1が発現し、再生芽の形成、維持にFgfシグナルが働くことがゼブラフィッシュで示されているが、再生芽誘導機構やその後の組織再生を司る分子メカニズムは明らかにされていない。そこで、ヒレ再生制御遺伝子群の網羅的単離を目的にEST解析を行った。形態学的観察結果をもとに再生芽形成が盛んな再生3日目、後期の組織再生が盛んな再生10日目ヒレよりcDNAライブラリーを構築し各ステージ10,000クローンのランダムシークエンスを行った。シークエンスの完了した再生10日目EST7,006クローンの配列情報に基づきクラスタリング解析を行った結果、独立した3,461種類の遺伝子が含まれること、さらに5'上流配列に基づくblast解析を行った結果、その約6割が既知遺伝子であることが明らかになった。再生芽が形成され、幹細胞が分化開始する時期であるメダカヒレ再生3日目のcDNAライブリーを構築し、遺伝研において10,000シークエンスが終了した。その結果8,901個のシークエンスが得られ、そのうち3,454種類の遺伝子が含まれ、1個しかシークエンスがなかったものが2,323個あり全体の67.2%を占めた。3,454のうち1,166クラスター(33.8%)のみが10日目のシークエンスと重なっており、再生芽特異的cDNAがかなり含まれていると思われる。3日と10日のESTクローンから新規の遺伝子を中心に3,000個を選びDNAマイクロアレイを作成した。このDNAチップを用い、ヒレ再生1日目、3日目、10日目通常ヒレのRNAをハイブリダイズし、解析した結果ヒレ再生1日目に特異的なクローン26個を得た。

こ れ ま で に regeneration bud に fgfr1 が 発 し, regeneration bud の formation, maintain に Fgf シ グ ナ ル が 働 く こ と が ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ で shown さ れ て い る が, regeneration bud induction や そ の の tissue regeneration after を department る molecular メ カ ニ ズ ム は Ming ら か に さ れ て い な い. そ こ で, ヒ レ regeneration system of royal heritage 伝 subgroup の snare 単 from を purpose に EST analytical line を っ た. Morphology 観 examine results を も と に regeneration bud formation が sheng ん な 3 orders, late の tissue regeneration が sheng ん な regeneration 10 mesh ヒ レ よ り cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を build し each ス テ ー ジ 10000 ク ロ ー ン の ラ ン ダ ム シ ー ク エ ン ス を line っ た. Finished シ ー ク エ ン ス の し た mesh EST7 regeneration of 10, 006 ク ロ ー ン の match column intelligence に base づ き ク ラ ス タ リ ン グ parsing line を っ た results, independent し た 3461 kinds の heritage 伝 son が containing ま れ る こ と, さ ら に 5 'に LiuPei column base on づ く blast line analytical を っ た results, そ の about six cut が son already know but 伝 で あ る こ と Youdaoplaceholder0 Ming ら になった. Regeneration bud が form さ れ, differentiation of stem cells が began す る period で あ る メ ダ カ ヒ レ regeneration 3 orders の cDNA ラ イ ブ リ ー を constructing し, heritage 伝 research に お い て 10000 シ ー ク エ ン ス が end し た. そ の results 8901 の シ ー ク エ ン ス が have ら れ, そ の う ち 3454 kinds の heritage 伝 son が containing ま れ, 1 し か シ ー ク エ ン ス が な か っ た も の が 2323 あ り accounted for 67.2% all の を め た. 3454 の う ち 1166 ク ラ ス タ ー (33.8%) の み が 10 mesh の シ ー ク エ ン ス と heavy な っ て お り, regeneration bud specific cDNA が か な り containing ま れ て い る と think わ れ る. 3 と 10 の EST ク ロ ー ン か ら new rules の posthumous son 伝 を center に 3000 を choose び DNA マ イ ク ロ ア レ イ を made し た. こ の DNA チ ッ プ を い, ヒ レ regeneration 1 yard, 3, 10 orders, usually ヒ レ の RNA を ハ イ ブ リ ダ イ ズ し, parse し た results ヒ レ regeneration 1 eye に specific な ク ロ ー ン 26 を た.

项目成果

Kaji, K., Oda, S., Miyazaki, S, Kudo, A: "Infertility of CD9-deficient mouse eggs is reversed by mouse CD9, human CD9, or mouse CD81 ; Polyadenylated mRNAinjection developed for molecular analysis of sperm-egg fusion"Dev.Biol.. 247. 327-334 (2002)

Kaji, K.、Oda, S.、Miyazaki, S、Kudo, A：“小鼠 CD9、人 CD9 或小鼠 CD81 可以逆转缺乏 CD9 的小鼠卵子的不育性；为精卵融合的分子分析而开发的聚腺苷酸化 mRNA 注射

Arai, S., Amizuka, N., Azuma, Y., Kudo, A.: "OCRA, a novel molecule on mouse stromal cells, regulates osteoclastogenesis"J.Bone Miner.Res. (in press). (2003)

Arai, S.、Amizuka, N.、Azuma, Y.、Kudo, A.：“OCRA 是小鼠基质细胞上的一种新型分子，可调节破骨细胞生成”J.Bone Miner.Res。

Kanazawa, K., Azuma, Y., Nakano, H., Kudo, A.: "TRAF5 functions in both RANKL-and TNFα-induced osteoclastogenesis"J.Bone Miner.Res.. (in press). (2003)

Kanazawa, K.、Azuma, Y.、Nakano, H.、Kudo, A.：“TRAF5 在 RANKL 和 TNFα 诱导的破骨细胞生成中发挥作用”J.Bone Miner.Res..（出版中）。

Nagaya, M., Inohaya, K., Imai, Y, Kudo, A.: "Expression of zisp, a DHHC zinc finger gene, in somites and lens during zebrafish embryogenesis"Mech.Dev.. (in press). (2003)

Nagaya, M.、Inohaya, K.、Imai, Y、Kudo, A.：“斑马鱼胚胎发生过程中体节和晶状体中 zipsp（一种 DHHC 锌指基因）的表达”Mech.Dev..（出版中）。

Oshima, A., Tanabe, H., Yan, T., Lowe, G.N., Glackin, C.A., Kudo, A.: "A nobel mechanism for the regulation of osteoblast differentiation. : Transcription of periostin, a member of the fasciclin I family, is regulated by the bHLH transcription factor, Twi

Oshima, A.、Tanabe, H.、Yan, T.、Lowe, G.N.、Glackin, C.A.、Kudo, A.：“调节成骨细胞分化的诺贝尔机制。：骨膜蛋白（肌束蛋白 I 成员）的转录