平滑筋細胞の分化増殖および血管病変形成におけるCREBの果たす役割に関する研究

CREB在平滑肌细胞分化增殖及血管病变形成中的作用研究

• 批准号: 12877113
• 负责人: 竹下 彰
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877113/
• 关键词: 腫瘍壊死因子; cAMP response element binding protein; アポトーシス; dominant negative; アンジオテンシンII; トロンビン

Cyclic AMP response elemcnt(CRE)binding protein(CREB)はCyclic AMPによって活性化されるProtein kinase A(PKA)やCa^<2+>/Calmodulin dependent kinaseにより133番目のアミノ酸であるセリン残基がリン酸化されると活性化される。活性化されたCREBはプロモーター領域にCREを有する遺伝子の転写活性を上昇させる。しかし血管平滑筋細胞や血管病変形成の過程においてCREBがどのような役割を果たすかについてはほとんど知られていない。本研究の目的はDN-CREBを平滑筋細胞に過剰発現させその作用を阻害することにより、CREが平滑筋細胞の分化や増殖、血管病変形成に果たす役割を明らかにすることである。本年度はサイトカインによる平滑筋細胞におけるCREBの活性化について検討した。CREBの活性化は133番目のセリンのリン酸化を認識する抗体を用いたウエスタンブロットによって行った。腫瘍壊死因子(Tumor necrosis factor : TNF)はCREBのリン酸化を誘導した。またCREを含むルシフェレースベクターを用いて、検討したところTNFはCRE依存性の遺伝子発現を促進した。阻害剤を用いた実験より、CREBのリン酸化にはp38mitogen-activated protein kinaseが関与していることが明かとなった。Dominant Negative(DN)-CREBの過剰発現は培養平滑筋細胞にアポトーシスを誘導した。これは抗アポトーシス分子であるBcl2の発現低下によるものと考えられた。ラット頸動脈をバルーン傷害すると新生内膜から形成される。CREBは主に新生内膜の平滑筋細胞に発現しリン酸化も亢進していた。この傷害血管にアデノウイルスを用いてDN-CREBを発現させると、新生内膜の形成が約40%抑制された。この際BrdUの取込みの低下や、アポトーシスの増加が観察された。以上の結果より、CREBが血管平滑筋細胞の増殖や肥大、アポトーシスなどを制御し、動脈硬化などの血管病変の形成に重要な役割をはたすことが明かとなった。

Cyclic AMP response elemcnt(CRE)binding protein(CREB) によって Cyclic AMPによって activated されるProtein kinase A(PKA)やCa^<2+>/Calmodulin Time dependent kinase に よ り 133 mesh の ア ミ ノ acid で あ る セ リ ン residues が リ ン acidification さ れ る と activeness さ れ る. Activeness さ れ た after CREB は プ ロ モ ー タ ー field に CRE を have す る heritage 伝 son の planning write activity を rise さ せ る. し か し vascular smooth muscle cell や vascular disease - formation の に お い て after CREB が ど の よ う な "を cut fruit た す か に つ い て は ほ と ん ど know ら れ て い な い. Purpose this study の は DN - after CREB を に smooth muscle cells through turning 発 now さ せ そ の role を resistance against す る こ と に よ り, CRE が の smooth muscle cell differentiation, vascular disease - forming に fruit た や raised colonization す "を cut Ming ら か に す る こ と で あ る. This year, サ サ トカ トカ <s:1> による による による smoothing fascia cells におけるCREB <s:1> activation に た て検 て検 て検 to discuss た た. After CREB の activeness は 133's mesh の セ リ ン の リ ン acidification を know す を る antibody with い た ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ っ て line っ た. Abscess 壊 death factor (Tumor necrosis factor: TNF) リ CREB リ acidification を induction <s:1> た. ま た CRE を containing む ル シ フ ェ レ ー ス ベ ク タ ー を with い て, beg し 検 た と こ ろ TNF は CRE dependency の heritage 伝 son 発 を now promote し た. Resistance against tonic を い た be 験 よ り, after CREB の リ ン acidification に は p38mitogen - activated protein kinase が masato and し て い る こ と が Ming か と な っ た. Dominant Negative(DN)-CREB <s:1> overgrowth occurs in <s:1> culture smooth tendon cells にアポト にアポト シスを シスを induces <s:1> た. The <s:1> れ アポト anti-ア ポト シス シス has a low performance of the であるBcl2 <s:1> molecule による <s:1> と と is found to be えられた. Youdaoplaceholder0 carotid artery をバ をバ をバ ラット をバ をバ をバ injury すると neointima ら formation される. CREB に main に neoplasmic endometrial <s:1> smooth fascia cells に are present, <s:1> リ <s:1> acidification hyperactive, <s:1> て た た た. こ の damage blood vessels に ア デ ノ ウ イ ル ス を with い て DN - after CREB を 発 now さ せ る と, neointimal の formation が about 40% inhibition さ れ た. The BrdU of the <s:1> <s:1> boundary is taken as the や below the 込み boundary, and the アポト シス シス boundary is increased by the が観 boundary された. Results above の よ り, after CREB が や hypertrophy and vascular smooth muscle cell の raised colonization ア ポ ト ー シ ス な ど を suppression し, arteriosclerosis な ど の vascular disease - cut を の form important な に service は た す こ と が Ming か と な っ た.

项目成果

Tokunon T, Ichiki T, Takeshita A: "Thrombin induces interleukin-6 expression through the cAMP response element in vascular smooth muscle cells"Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 21. 1759-1763 (2001)

Tokunon T、Ichiki T、Takeshita A：“凝血酶通过血管平滑肌细胞中的 cAMP 反应元件诱导白介素 6 表达”动脉硬化、血栓形成和血管生物学。

Tokunou T, Ichiki T, Takeshita A: "cAMP response element-binding protein mediates thrombin-induced proliferation of vascular smooth muscle cells"Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 21. 1764-1769 (2001)

Tokunou T、Ichiki T、Takeshita A：“cAMP 反应元件结合蛋白介导凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖”动脉硬化、血栓形成和血管生物学。