p53遺伝子導入を併用した悪性グリオーマの集学的治療

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昨年度の研究でWild-type-p53発現アデノウイルス導入後どのタイミングで放射線治療、化学療法を施行するのが最も効果的かをin vivoで検討した。その結果、放射線照射や細胞周期非特異的に作用する抗癌剤(シスプラチンやBCNU)は遺伝子導入後、強制発現させたp53がピークに達する時期(48時間後)に行う方法が最も有効であった。一方、細胞周期特異的に作用するトポイソメラーゼI阻害剤(SN-38)ではp53遺伝子を導入前に薬剤を投与した方が、遺伝子導入後に投与するよりも細胞のアポトーシスを誘導した(論文準備中)。本年度はこのin vitroの結果が小動物を用いたin vivoの系でも再現できるかを検討した。さらにその機序を解明する目的で、強制発現されたp53遺伝子のセリン残基のリン酸化の詳細な検討を行った。昨年度の研究でセリン15、20、46のリン酸化が細胞アポトーシス誘導効果に比例することがわかっていたので、当初はこれらセリン残基をアラニンに変えたプラスミドを用いて、セリン残基のリン酸化を阻害することで、アポトーシス誘導効果が抑制されるかを検討した。しかしp53遺伝子の導入効率が悪いこともあり、有意な結果が得られなかった。そこでp53遺伝子のスレオニン18とセリン20をアスパラギン酸に変えたアデノウイルスおよびセリン15とセリン20をアスパラギン酸に変えたウイルスを使い、細胞のアポトーシス誘導効果を検討した。セリン残基をアスパラギン酸に変えることで、リン酸化したセリン残基を模倣した状態が作れるためである。その結果どちらのウイルスもWild-type-p53発現アデノウイルスよりも強力に、細胞のアポトーシスを誘導できるようになった。現在、これらのMutant-p53を遺伝子導入された場合に発現が誘導される遺伝子をmRNAレベルで解析中である。