消毒剤耐性変異の獲得に伴うMRSAのβラクタム系抗生物質耐性の上昇

由于获得消毒剂耐药性突变，MRSA 对 β-内酰胺类抗生素的耐药性增加

• 批准号: 12877357
• 负责人: 関水 和久
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877357/
• 关键词: MRSA; 黄色ブドウ球菌; 消毒剤耐性; オキサシリン; βラクタム耐性; ベンザルコニウム; ショットガンクローニング; クローニング

本研究の目的は、消毒剤耐性を指標に分離されたオキサシリン強度耐性株から、消毒剤耐性かつオキサシリン耐性を導く遺伝子変畢を同定することである。この目的を違成するため、我々は、まず黄色ブドウ球菌の変異株から変異遺伝子を同定する系の構築を試みた。具体的には、増殖が温度感受性となる黄色プドウ球菌変異株を分離し、温度感受性を相補する遺伝子の同定を行える系の構築を行っ本研究の目的は、消毒剤耐性を指標に分離されたオキサシリン強度耐性株から、消毒剤耐性かつオキサシリン耐性を導く遺伝子変畢を同定することである。この目的を違成するため、我々は、まず黄色ブドウ球菌の変異株から変異遺伝子を同定する系の構築を試みた。具体的には、増殖が温度感受性となる黄色プドウ球菌変異株を分離し、温度感受性を相補する遺伝子の同定を行える系の構築を行った。まず、黄色ブドウ球菌を変異源EMMで処理した後、細胞増殖が温度感受性を示す変異株を分離した。次に、黄色ブドウ球菌のゲノムDNAのライブラリーを構築し、温度感受性黄色ブドウ球菌侍の温度感受性を相補する遺伝子断片の収得を行った。その結果、複数の独立した温度感受性株について、温度感受性を相補する遺伝子断片を得ることが出来た。温度感受性を相補する遺伝子断片の塩基配列決定を行い、さらに温度感受性を相補する断片の最少領域を決定する実験から、温度感受性の責任遺伝子としてdnaE, polC, dnaC遺伝子をそれぞれ同定した。dnaE, polC,遺伝子は共にDNAポリメレースをコードする。dnaE・PolCの温度感受性株を同一の菌から分離できたのは本研究が初めてである。この繕果は、最近のDNA複製において、2穫類のDNAポリメレースが役割分担を行っていることを初めて示唆した結果である。また、黄色ブドウ球菌より、dnaC遺伝子の温度感受性変異を分離したのも本研究が初めてである。

Purpose の this study は separation, disinfection tonic patience を に さ れ た オ キ サ シ リ ン strength endurance strain か ら, disinfection tonic patience か つ オ キ サ シ リ ン patience を guide く heritage 伝 sub - bi を be す る こ と で あ る. こ の purpose を breach into す る た め, I 々 は, ま ず yellow ブ ド ウ aureus の - different strains か ら - different heritage 伝 を son be す る is の build を try み た. Specific に は, raised colonization が temperature sensitivity と な る yellow プ ド ウ aureus - different strains を separation し, temperature sensitivity を phase fill す る posthumous son 伝 の with fixed line を え る is の line build を っ の purpose this study は separation, disinfection tonic patience を に さ れ た オ キ サ シ リ ン strength endurance strain か ら, disinfection tonic patience か つ オ キ サ シ リ ン patience を guide く 伝 sub - finish を with Determine する とである. こ の purpose を breach into す る た め, I 々 は, ま ず yellow ブ ド ウ aureus の - different strains か ら - different heritage 伝 を son be す る is の build を try み た. Specific に は, raised colonization が temperature sensitivity と な る yellow プ ド ウ aureus - different strains を separation し, temperature sensitivity を phase fill す る heritage 伝 son の with fixed line を え る line is の build を っ た. ま ず, yellow ブ ド ウ aureus を - heterologous EMM で 処 Richard し た, cell raised after colonization が temperature sensitivity を shown す - different strains を separation し た. Time に, yellow ブ ド ウ aureus の ゲ ノ ム DNA の ラ イ ブ ラ リ ー を build し, temperature sensibility yellow ブ ド ウ aureus shi の temperature sensitivity を phase fill す る heritage 伝 son fragment の 収 should を っ た. そ の results, plural の independent し た temperature sensitivity strains に つ い て, temperature sensibility を phase fill す る heritage 伝 son を fragment must る こ と が た. Temperature sensitivity を phase fill す る heritage 伝 son fragment の salt base line column decided を い, さ ら に temperature sensitivity を phase fill す る fragment の field at least を decided す る be 験 か ら, temperature sensibility の responsibility heritage 伝 son と し て dnaE, polC, dnaC heritage 伝 son を そ れ ぞ れ with fixed し た. dnaE, polC, 伝 offspring 伝 co-に DNAポリメレ 伝 スをコ ドする ドする. The dnaE · PolC <s:1> temperature-sensitive strain を was isolated from the same <s:1> bacteria ら ら, で で た <s:1> <s:1> in this study が initial めてである. こ の repair fruit は, recently の DNA replication に お い て, 2 class の DNA ポ リ メ レ ー ス が battle line cut share を っ て い る こ と を early め て in stopping し た results で あ る. Youdaoplaceholder0, yellow ブドウ cocci よ, dnaC progeny 伝 temperature sensitivity variation を isolation た た <s:1> また また this study が initial めてである.

项目成果

Makoto Takata: "Mutant DnaA proteins detective in duplex opening of orIC, the origin of chromosomal DNA replication In Escherichia coli"Molecular Microbiology. 35・2. 454-462 (2000)

高田诚：“orIC 双链体开放中的突变 DnaA 蛋白，大肠杆菌中染色体 DNA 复制的起源”《分子微生物学》35・2（2000 年）。

Inooe R.et al.: "Genetic identification of two distinct DNA polymerases DnaE and PolC, essential for chromosomal DNA replication Staphylococcus aureus"Mol.Genet.Genomics. 266. 564-571 (2001)

Inooe R.等人：“两种不同的 DNA 聚合酶 DnaE 和 PolC 的基因鉴定，对于染色体 DNA 复制金黄色葡萄球菌至关重要”Mol.Genet.Genomics。

Nobuyoshi Akimitsu: "Increase In Resistance of Methicilin-Resistant Staphylococcus aureus to β-Lactams Caused by Mutations Conferring Resistance to Benzalkonium Chioride, a Disintectant Widely Used is Hospitals"ANTIMICROBIAL ACENTS AND CHEMOTHERAPY. 43・12

Nobuyoshi Akimitsu：“耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对医院广泛使用的消毒剂苯扎氯铵的突变导致的β-内酰胺耐药性增加”抗菌剂和化疗43・12。

Taemi KONOO: "Suppression of temperature-sensitivity of a dnaA46 mutant by excessive DNA supercolling"Biochem.J.. 348. 375-379 (2000)

Taemi KONOO：“通过过度 DNA 超冷抑制 dnaA46 突变体的温度敏感性”Biochem.J.. 348. 375-379 (2000)

Tsutomu Katayama: "Inactivation of Escherichia coli DnaA protein by DNA polymerase III and negative regulations for initiation of chromosomal replication"Biochimie. 81. 835-840 (1999)

Tsutomu Katayama：“DNA 聚合酶 III 灭活大肠杆菌 DnaA 蛋白以及启动染色体复制的负调节”Biochimie。