消毒剤耐性変異の獲得に伴うMRSAのβラクタム系抗生物質耐性の上昇

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本研究の目的は、消毒剤耐性を指標に分離されたオキサシリン強度耐性株から、消毒剤耐性かつオキサシリン耐性を導く遺伝子変畢を同定することである。この目的を違成するため、我々は、まず黄色ブドウ球菌の変異株から変異遺伝子を同定する系の構築を試みた。具体的には、増殖が温度感受性となる黄色プドウ球菌変異株を分離し、温度感受性を相補する遺伝子の同定を行える系の構築を行っ本研究の目的は、消毒剤耐性を指標に分離されたオキサシリン強度耐性株から、消毒剤耐性かつオキサシリン耐性を導く遺伝子変畢を同定することである。この目的を違成するため、我々は、まず黄色ブドウ球菌の変異株から変異遺伝子を同定する系の構築を試みた。具体的には、増殖が温度感受性となる黄色プドウ球菌変異株を分離し、温度感受性を相補する遺伝子の同定を行える系の構築を行った。まず、黄色ブドウ球菌を変異源EMMで処理した後、細胞増殖が温度感受性を示す変異株を分離した。次に、黄色ブドウ球菌のゲノムDNAのライブラリーを構築し、温度感受性黄色ブドウ球菌侍の温度感受性を相補する遺伝子断片の収得を行った。その結果、複数の独立した温度感受性株について、温度感受性を相補する遺伝子断片を得ることが出来た。温度感受性を相補する遺伝子断片の塩基配列決定を行い、さらに温度感受性を相補する断片の最少領域を決定する実験から、温度感受性の責任遺伝子としてdnaE, polC, dnaC遺伝子をそれぞれ同定した。dnaE, polC,遺伝子は共にDNAポリメレースをコードする。dnaE・PolCの温度感受性株を同一の菌から分離できたのは本研究が初めてである。この繕果は、最近のDNA複製において、2穫類のDNAポリメレースが役割分担を行っていることを初めて示唆した結果である。また、黄色ブドウ球菌より、dnaC遺伝子の温度感受性変異を分離したのも本研究が初めてである。