克隆小麦、马铃薯和胡萝卜的紫外线损伤修复光恢复基因-猫眼课题宝

克隆小麦、马铃薯和胡萝卜的紫外线损伤修复光恢复基因

批准号：

01F00345

负责人：

山本和生

金额：

$1.02万

依托单位：

Tohoku University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

财政年份：

2001

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

2001 至 2002

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01F00345/

关键词：

紫外線損傷光回復遺伝子可視光線 GC content 吸収スペクトル FAD GST-fusion 抗血清

中文摘要

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英文摘要

紫外線損傷の光回復に関わる遺伝子を、イネ、麦、大豆、ジャガイモ、人参などの有用植物からクローニングし、光回復遺伝子を操作する事で、将来紫外線耐性の植物を作る計画をたてている。先ず手始めに、イネ光回復遺伝子のクローニングを行い、遺伝子産物のin vitroでの解析を行った。イネ光回復遺伝子の場合、大腸菌で発現させると、大腸菌の光回復欠損を相補することができた。精製した酵素はin vitroでDNA上の紫外線損傷を可視光線照射に依存して修復することができた。cDNA全長1521塩基対の前1/3のGC contentは約75%で、のこり2/3の50%と顕著な違いを示した。また、in vivoでは2種類の転写産物のあることが明らかとなった。酵素の吸収スペクトルを調べたところ、380nmと450nmに吸収を持っていた。酵素を95℃で煮沸した上清の吸収スペクトルを調べたところ、380nmと450nmに吸収を持ち、市販のFADを同じ吸収特性を示した。従って、イネ光回復酵素にはFADが光吸収物質として結合していることが明らかとなった。次にこの経験をもとに、麦、大豆、ジャガイモ、人参などから光回復遺伝子のクローニングを試み、今のところ、大豆からcDNAをクローニングすることに成功している。大豆光回復酵素はイネのそれと70%以上の相同性を持っており、500アミノ酸が作る大豆蛋白質をGST-fusionの形で大腸菌で大量発現させ、タンパク質を精製したところ、大腸菌の光回復遺伝子欠損を相補し、in vitroで紫外線損傷を修復した。現在は、酵素学的特性を明らかにするとともに、酵素に対する抗血清を作成し、これを用いて、大豆そのものから酵素を精製することを計画している。

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会议论文

Tokuhisa Hirouchi: "Class II DNA photolyase gene from Oryza sativa ; Cloning the cDNA by dilution-amplification"Molecular and General Genetics. (in press). (2003)

Tokuhisa Hirouchi：“来自稻的 II 类 DNA 光解酶基因；通过稀释-扩增克隆 cDNA”《分子与普通遗传学》。

DOI： --

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影响因子： --

作者：

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