放射線抵抗細菌Deinococcus radioduransのDNA2本鎖切断修復

耐辐射细菌耐辐射球菌中的 DNA 双链断裂修复

• 批准号: 12206013
• 负责人: 山本 和生
• 金额: --
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206013/
• 关键词: D.radiodurans; 放射線超耐性; 全ゲノム配列; スミドライブラリー; ゲノム破壊; クロラムフェニコール遺伝子; lacZ遺伝子; X-gal

真性綿菌D.radioduransは放射線超耐性の生物である。本研究は、放射線超耐性の仕組みを明らかにすることである。1)分離してある放射線感受性変異の原因遺伝子をクローニングするために、λファージのコスミドライブラリーを用いて形質転換し、放射線抵抗性を示すλファージを検索し、recA、recN、lexAなどのhomologをクローニングした。このアプローチではうまくクローニングできないものに関しては、大腸菌とD.radioduransとのシャトルベクターを用いてクローニングを継続中である。2)1999年に発表された全ゲノム配列に含まれる機能未知のORFは約1000個である。この中に放射線超耐性を決定する遺伝子があると考え、網羅的なゲノム破壊を計画した。そのために先ず、PCRによって増幅した全長遺伝子の中程にクロラムフェニコール遺伝子を挿入し、double crossing overによって染色体遺伝子破壊を試みた。この方法によってrecA遺伝子やlexA遺伝子を破壊することができたので、未知の遺伝子に対しても同様に破壊を行っている。また、未知のORFの中程をPCR増幅しクローニングした断片を、プラスミドに乗せたままでsingle crossing overによって染色体に挿入することでも変異体が得られることがわかった。今後はこれらの方法を用いて1000個のORFを網羅的に破壊し、放射線耐性に関わる遺伝子を突き止めてゆきたい。3)DNA損傷をシグナルとして発現する遺伝子を検索するために、シャトルベクターにプロモーターの無い大腸菌lacZ遺伝子をクローニングした。この5'上流に、D.radioduransの染色体断片をクローニングし、X-galで青いコロニーを作るものを集めて解析することのできるpromoter trapを作成した。これを用いて今後は放射線誘導遺伝子の解析を行う予定である。

D. adiodurans, a radiation-tolerant <s:1> organism である. In this study, みを and the radiation hypertolerant group みを Ming ら とである にする とである とである. 1) separation し て あ る radiation sensitivity - cause of different の survived 伝 を ク ロ ー ニ ン グ す る た め に, lambda フ ァ ー ジ の コ ス ミ ド ラ イ ブ ラ リ ー を with い て form quality planning in し and radiation resistance を す lambda フ ァ ー ジ を 検 cable し, rec a, recN, lexA な ど の homolog を ク ロ ー ニ ン グ し た. こ の ア プ ロ ー チ で は う ま く ク ロ ー ニ ン グ で き な い も の に masato し て は, coliform と D.r adiodurans と の シ ャ ト ル ベ ク タ ー を with い て ク ロ ー ニ ン グ を 継 続 in で あ る. 2) In 1999, に released a table showing that された was fully ゲノム equipped with に containing まれる functions of unknown <s:1> ORF に approximately 1000 である. こ の に radiation in super patience を decided す る posthumous son 伝 が あ る と え test, snare な ゲ ノ ム broken 壊 を project し た. そ の た め に ず first, PCR に よ っ て rights of し た span heritage 伝 son の medium-range に ク ロ ラ ム フ ェ ニ コ ー ル posthumous son 伝 を scions into し, double crossing over に よ っ て chromosome heritage 伝 son broken 壊 を try み た. こ の way に よ っ て rec a posthumous son 伝 や lexA posthumous son 伝 を broken 壊 す る こ と が で き た の で, unknown の but 伝 に し seaborne て も with others に broken 壊 を line っ て い る. ま た, unknown の ORF の medium-range を PCR rights of し ク ロ ー ニ ン グ し た を fragment, プ ラ ス ミ ド に 乗 せ た ま ま で single crossing over に よ っ て chromosome に scions into す る こ と で も - variant が must ら れ る こ と が わ か っ た. Future は こ れ ら の way を with い て 1000 の ORF を snare に broken 壊 し, radiation tolerance に masato わ る posthumous son 伝 を tu き check め て ゆ き た い. 3) DNA damage を シ グ ナ ル と し て 発 now す る posthumous son 伝 を 検 cable す る た め に, シ ャ ト ル ベ ク タ ー に プ ロ モ ー タ ー の no い coliform lacZ posthumous son 伝 を ク ロ ー ニ ン グ し た. こ の 5 'upstream に, D.r adiodurans の chromosome fragment を ク ロ ー ニ ン グ し, X - gal で green い コ ロ ニ ー を as る も の を set め て parsing す る こ と の で き る promoter trap を made し た. <s:1> れを is determined by the subsequent <s:1> radiation-induced 伝 particle <s:1> analysis を line う and である.

项目成果

山本和生: "放射線抵抗性細菌デイノコックス・ラジオデュランス"遺伝. 54・5. 9-10 (2000)

Kazuo Yamamoto：“耐辐射细菌耐辐射球菌”遗传学 54・5（2000）。

Tanbir Najrana: "Spontaneous and osmium tetroxide induced mutagenesis in Escherichia coli strain deficient both endonuclease III and endonuclease VIII"Mutagenesis. 15. 121-125 (2000)

Tanbir Najrana：“缺乏核酸内切酶 III 和核酸内切酶 VIII 的大肠杆菌菌株中自发和四氧化锇诱导的诱变”诱变。

Eiji Yamamura: "Characterization of spontaneous mutation in the oxyR strain of Escherichia coli"Biochem Biophys Res Commun. 279. 427-432 (2000)

Eiji Yamamura：“大肠杆菌 oxyR 菌株自发突变的表征”Biochem Biophys Res Commun。

Takashi Watanabe: "Miscoding and misincorporation of 8-oxo-guanine during leading and lagging strand synthesis in Escherichia coli."Molecular and General Genetics. (in press). (2001)

Takashi Watanabe：“大肠杆菌前导链和滞后链合成过程中 8-氧代鸟嘌呤的错误编码和错误掺入。”分子与普通遗传学。

Tetsuya Ono: "Age-associated increase of spontaneous mutation frequency and molecular nature of mutation in newborn and old lacZ-transgenic mouse."Mutation Research. 447. 165-177 (2000)

Tetsuya Ono：“新生和老年 lacZ 转基因小鼠中自发突变频率和突变分子性质与年龄相关的增加。”突变研究。