チェックポイントコントロールにおけるRad24-RFC複合体の作用機構の解明

真核生物では、DNA損傷に応答してチェックポイントが活性化し、細胞周期の停止を引き起こす。出芽酵母のDNA損傷チェックポイントにおいて、ATM関連因子Mec1は中心的な役割を果たしている。Mec1はキナーゼであり、リン酸化によって下流にシグナルを伝達すると考えられている。Mec1はDNA損傷が生じると、損傷部位に結合することが報告されている。Rad9はDNA損傷に応答してMec1依存的にリン酸化されるタンパク質であり、このRad9のリン酸化はチェックポイントの活性化に必須である。前年度、Rad9がMec1同様、DNA損傷部位に結合すること、また、Rad9の損傷部位への結合にはMec1のキナーゼ活性が必要なことを明らかにした。今年度、引き続きRad9の損傷DNAへの結合についてMec1の関与に焦点をあて解析を行った。その結果、Mec1はin vitroにおいてRad9をリン酸化することが明らかになった。また、Mec1によるリン酸化サイトに変異を導入したRad9はDNA損傷部位への結合がみられなかった。これらの結果から、Rad9の損傷DNAへの結合には、Mec1によるリン酸化が重要であると考えられる。

真核生物では、DNA損傷に応答してチェックポイントが活性化し、細胞周期の停止を引き起こす。出芽酵母のDNA損傷チェックポイントにおいて、ATM関連因子Mec1は中心的な役割を果たしている。Mec1はキナーゼであり、リン酸化によって下流にシグナルを伝達すると考えられている。Mec1はDNA損傷が生じると、損傷部位に結合することが報告されている。Rad9はDNA損傷に応答してMec1依存的にリン酸化されるタンパク質であり、このRad9のリン酸化はチェックポイントの活性化に必須である。前年度、Rad9がMec1同様、DNA損傷部位に結合すること、また、Rad9の損傷部位への結合にはMec1のキナーゼ活性が必要なことを明らかにした。今年度、引き続きRad9の損傷DNAへの結合についてMec1の関与に焦点をあて解析を行った。その結果、Mec1はin vitroにおいてRad9をリン酸化することが明らかになった。また、Mec1によるリン酸化サイトに変異を導入したRad9はDNA損傷部位への結合がみられなかった。これらの結果から、Rad9の損傷DNAへの結合には、Mec1によるリン酸化が重要であると考えられる。