魚類アレルゲンの分析法の確立、エピトープ解析および低減化技術の開発

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1、初年度に全塩基配列および演繹アミノ酸配列を明らかにしたマサバパルブアルブミン(PA)をもとに、合成ペプチドを作製しIgE結合エピトープの解析を行った。複数の患者血清を合一して評価したところ、複数のエピトープが存在することを明らかにした。現在、さらに研究を進めているところである。2、各種魚肉加熱抽出液のアレルゲン性は魚種間で異なる。この原因を解明するために、各魚種普通筋中のPA含量を測定し、そのアレルゲン性を複数の患者血清を用いて調べた。その結果、アレルゲン性の差は含量だけでは説明がつかず、PAのアミノ酸配列と含量の両方が関与していると考えられた。3、魚類同様、筋肉に多量のPAをもつウシガエルを試料に、PAの精製およびその性状解明を行った。また、魚類アレルギー患者血清を用いてウシガエルPAと魚類PAの交叉性を調べた。その結果、魚類のPAではβ型が主流であったが、ウシガエルにはαとβの二種類が存在した。またウシガエルPAとの反応性は患者間で異なり、同じPAをアレルゲンとする患者にとってもエピトープが異なることが示唆された。さらにウシガエルPAがPA患者のエピトープ判断に応用できると考えられた。4、昨年度から引き続き行りているPAのT細胞エピトープ解析は、樹立がうまくいかず、甲殻類のアレルゲンであるトロポミオシンで再検討を行った。その結果、トロポミオシンに反応するT細胞の樹立に成功した。現在、トロポミォシンの合成ペプチドを用いたT細胞エピトープ解析を行っているところである。また同条件で再度PAでの感作を試みている。5、イムノブロットおよびELISAによる複数の魚類アレルギー患者血清を用いたスクリーニングを行った。その結果、すべての患者においてPAかコラーゲンのいずれか、もしくは両方に反応が認められた。しかし、イムノブロットとELISAの相関は必ずしも得られず、今後の診断基準には両測定方法を併用して行う必要があると判断した。