ショウジョウバエをモデルとした生殖細胞決定機序の解明

以果蝇为模型阐明生殖细胞决定机制

• 批准号: 01J09416
• 负责人: 重信 秀治
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J09416/
• 关键词: 生殖細胞; 極細胞; EST; ショウジョウバエ; マイクロアレイ; in situハイブリダイゼーション; トランスクリプトーム解析

ショウジョウバエの生殖細胞は,初期胚の後極に形成される極細胞とよばれる細胞に由来する.極細胞は胚内を移動した後生殖巣に取り込まれ,生殖系列特異的遺伝子を発現し,生殖系列としてのアイデンティティを確立すると考えられている.私はこの時期の生殖巣のトランスクリプトーム情報を得ることが,生殖系列の決定機構を解明する上で有効な手段と考えており,本年度は以下の実験を行った.1.胚生殖巣のEST解析□極細胞でのみGFPを発現するショウジョウバエを用いてFACSにより生殖巣を単離した.この生殖巣からcDNAライブラリーを作成しEST解析を行った.計20,227ESTが得られた.2.胚生殖巣の網羅的in situハイブリダイゼーション□上記(1)の解析で見いだされた胚生殖巣で発現する3,000余の遺伝子全てについて,in situハイブリダイゼーションを行い,mRNAの局在を調べた.その結果胚生殖巣に選択的に発現する遺伝子を約150個見いだすことに成功した.3.胚生殖巣のマイクロアレイ解析□胚生殖巣で発現が亢進している遺伝子を探索するために,DNAマイクロアレイ解析を行った.(1)と同じ方法で得られた単離生殖巣のmRNAを,胚全体から得られたmRNAと比較し,発現プロファイルの比較を行った.その結果,胚生殖巣での発現が胚全体の5倍以上の遺伝子200,3倍以上の遺伝子500を見いだした.4.トランスクリプトームデータからのデータマイニング□上記1-3によって,胚生殖巣で発現の高い遣伝子を多数同定することが出来た.これらは生殖細胞の決定や分化に関わる遺伝子の有力な候補といえる.これらの遣伝子が全体としてどのような特徴をもっているか,ゲノムデータやFlyBaseデータベースを用いて全体の傾向を調べたところ,いくつか特徴的な機能カテゴリーに分類される遺伝子群が統計的に有意に生殖巣で発現が亢進していることが明らかになった.

The germ cells of the early embryo are formed in the posterior pole of the embryo, and the germ cells are formed in the posterior pole of the embryo. The germ line is specific to the germ line, and the germ line is established. 1. EST Analysis of Embryo Reproductive System (EST); GFP Expression in Polar Cells; FACS Analysis of Embryo Reproductive System (EST); This is the first time that we've ever had a chance to analyze EST. 2. More than 3,000 ESTs were detected in the embryonic reproductive system in situ, and mRNA expression was modulated in situ. About 150 genes were successfully detected in the embryonic reproductive system. 3. DNA analysis of embryonic reproductive system was carried out. (1)Using the same method, we obtained mRNA from isolated reproductive organs, compared mRNA from the entire embryo, and performed comparisons with discovery tools. As a result, more than 5 times the number of embryos and more than 5 times the number of embryos and more than 3 times the number of embryos were detected. 4. The number of embryos and more than 5 times the number of embryos and more than 5 times the number of embryos and more than 3 times the number of embryos were detected. The germ cells are determined to differentiate, and the seed is a powerful candidate. In this case, the characteristics of the whole population should be adjusted, and the characteristics of the whole population should be adjusted, and the characteristics of the whole population should be adjusted.

项目成果

Shimomura S, Shigenobu S, Morioka M, Ishikawa H.: "An experimental validation of orphan genes of Buchnera, a symbiont of aphids"Biochem Biophys Res Commun. 292(1). 263-267 (2003)

Shimomura S、Shigenobu S、Morioka M、Ishikawa H.：“蚜虫共生体 Buchnera 孤儿基因的实验验证”Biochem Biophys Res Commun。