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高分子量蛋白質複合体の溶液構造決定法の開発

高分子量蛋白质复合物溶液结构测定方法的开发

基本信息

批准号：
13014221
负责人：
伊藤隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成13年度の研究実績は以下の通りである.酵母YUHlとUbの相互作用の系については,35kDaの共有結合複合体試料について大まかな高次構造を決定するために,選択的プロトン標識試料を作成し解析を行った.IleのHD1#,LeuのHD#,ValのHG#の標識にはKayらによって提案された方法を用いた.高分子量蛋白質の大まかな構造の決定には,メチルプロトンの他に芳香族アミノ酸の側鎖プロトンからの距離情報が重要であることが知られている.今回は新たな試みとして,Phe,Tyr,Trpの共通の前駆体であるシキミ酸を用いた結果,α位β位(Trpの場合はさらに側鎖5員環)を重水素化しつつ,側鎖6員環部のみプロトン標識することに成功した.現在YUHl-Ub複合体について選択的プロトン標識試料から得られる少数のNOE情報と残余双極子カップリング情報を用いた効率的な構造解析法の確立を進めている.NMRを用いた蛋白質異種複合体の高次構造解析の際には,一方を安定同位体標識し,^<13>C/^<15>N選択/除去フィルターを組み込んだ測定を行うことで,分子内/分子間の距離情報の選別を行うのが普通である.今回は^<13>C/^<15>N標識された1種類の蛋白質複合体試料を用い,「それぞれの蛋白質の単体での高次構造と結合インターフェイスの情報から効率よく分子内/分子間の距離情報の選別を行い,半自動的に高次構造解析を行うシステム」の構築を試みた.テスト試料として用いた110残基と84残基の複合体試料の場合,まったく分子間NOEの帰属がない状態からスタートして,主鎖RMSDが0.7Å程度まで構造を収束させることに成功した.現在他の複合体の系において,このシステムの効率と安全性の検証を行っている.

Heisei 13 year research achievements are as follows: The interaction system of yeast YUHl and Ub was studied. The 35kDa consensus binding complex sample was used to determine the higher-order structure. The identification of HD1 #, Leu HD#,Val HG#was used to determine the method of Kay's identification. The determination of the structure of high molecular weight proteins is important for understanding the distance between aromatic compounds and acids. In this paper, we try to find a new way to identify the common precursor of Phe,Tyr,Trp. The result shows that the α-position β-position (in the case of Trp, the 5-member ring of the side lock) is replaced by heavy water, and the 6-member ring of the side lock is successfully identified. In order to establish the structural analysis method of high order structure analysis of protein heterocomplex, one side of stable isotope identification,^<13>C/^<15>N selection/removal, group identification, determination of intra/intermolecular distance information, and so on. In <13>this paper<15>, we try to construct a semi-automatic high-order structural analysis system for protein complex samples of 1 type identified by ^ C/^ N. In the case of complex samples with residues 110 and 84, the intermolecular NOE was successfully isolated, and the RMSD of the main lock was 0.7. Now his complex system is in the middle of the process, and the efficiency and safety of the system are being demonstrated.